[发明专利]一种用于肿瘤原位合成黑色素的工程化细菌及其应用

权利要求书

1.一种用于肿瘤原位合成黑色素的工程化细菌，其特征在于：所述工程化细菌是将包含编码酪氨酸酶的基因的温控型表达载体转化到细菌中得到，所述细菌为进入生物体内后能够在肿瘤微环境中蓄积和增殖的细菌，所述工程化细菌能够在肿瘤原位实现黑色素的可控合成。

2.根据权利要求1所述的工程化细菌，其特征在于：所述编码酪氨酸酶的基因经过密码子优化，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示。

3.根据权利要求1所述的工程化细菌，其特征在于：所述细菌为大肠杆菌Nissle 1917，所述温控型表达载体在近红外激光照射下能够启动所述编码酪氨酸酶的基因的表达。

4.权利要求1-3任一所述的工程化细菌在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：所述抗肿瘤药物包括所述工程化细菌。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述抗肿瘤药物还包括能在肿瘤微环境中释放Cu²⁺与酪氨酸的铜纳米颗粒。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述铜纳米颗粒的制备方法包括如下步骤：将Cys-Tyr二肽水溶液和NaOH溶液的混合液逐滴滴加到CuSO₄溶液中，滴加的同时不停搅拌，滴加完成后离心、去上清，用乙醇溶解沉淀，真空冷冻干燥得到铜纳米颗粒CuNPs固体。

7.一种生产黑色素的方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求1-3任一所述的工程化细菌发酵培养，向发酵液中加入Cu²⁺和L-酪氨酸，在高于42℃温度下诱导培养，合成黑色素。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述在高于42℃温度下诱导培养为在45℃恒温诱导培养至少24h。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述在高于42℃温度下诱导培养为用功率密度为1.5W/cm²的808nm激光照射发酵液至少15min后继续培养。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：在诱导培养的同时，向发酵液中通入氧气。