[发明专利]胞外表达人源Ly6d蛋白的重组表达质粒、重组细胞及构建方法

说明书

本发明属于人源Ly6d蛋白分泌表达技术领域，尤其涉及用于胞外表达人源Ly6d蛋白的重组表达质粒、重组细胞及构建方法。该重组表达质粒以包括基础质粒pcDNA3.1以及在所述基础质粒的酶切位点插入的用于表达人源Ly6d重组蛋白目的序列。该重组表达质粒转入EXPI293F细胞构建的重组细胞，能够在胞外高表达人源Ly6d，表达量达到255.67mg/1000mLCells，十分利于纯化和收集该重组蛋白，为其后续研究进行生产工作提供帮助。

本申请为申请日为2021年12月28日的中国发明专利申请：一种人源Ly6d重组蛋白细胞分泌表达方法及应用(申请号CN202111629570.3)的分案申请。

技术领域

本发明属于人源Ly6d蛋白分泌表达技术领域，尤其涉及一种人源Ly6d重组蛋白细胞分泌表达方法及应用。

背景技术

淋巴细胞抗原-6(LY6)复合物是一组同种异体抗原，于40年前首次在小鼠的淋巴细胞中被发现，其主要成员有LY6A/D/E/K/H，LY6家族成员的进化十分保守。据报道，LY6家族成员在癌症中发挥着重要左右，LY6K可以导致乳腺癌细胞转移，临床分析表明，LY6K与非小细胞肺癌患者的肿瘤分化、淋巴结转移和TNM分期有关。LY6D作为LY6家族成员中最为重要的成员之一，常用于开发多种癌症类型的新型治疗剂。

LY6D基因在多种类型的癌症中表达增加，并与细胞的粘附有关，且发现其可以作为晚期前列腺癌的预后因素，与患者生存的不良结果呈正相关，这表明LY6D将被作为不良预后的标志物。

LY6D不仅在癌症中至关重要，相关研究显示，LY6D在B淋巴细胞分化的表型和转录组异质性方面做出了重要贡献，在B淋巴细胞的增殖分化过程中占据着举足轻重的地位。但是，目前关于LY6D蛋白分泌表达的研究很少。而膜蛋白的表达是体外表达技术的难点，因为会发生不表达或表达出来的蛋白不可溶的问题，也会存在表达在细胞内不分泌的困难，或者仅能得到极少量的蛋白，无法满足后续实验需求，较难发挥其生物学功能。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种人源Ly6d重组蛋白细胞分泌表达方法及应用，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。

第一方面，本发明实施例公开了一种用于在EXPI293F细胞中胞外表达人源Ly6d蛋白的重组表达质粒，所述重组表达质粒包括基础质粒pcDNA3.1以及在所述基础质粒的酶切位点插入的用于表达人源Ly6d重组蛋白目的序列；所述目的序列的核苷酸序列包括：

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