[发明专利]一种植物病害生物防治菌株的筛选方法

说明书

本发明涉及防治菌株实验技术领域，且公开了一种植物病害生物防治菌株的筛选方法，所述筛选方法包括以下步骤：S1：筛选培养基；S2：制备锭粉培养基后，进行紫外线灭菌20min；S3：制备土壤稀释液，选取果园内、花坛地方的土样，铲产去表层，取5～15CMM处5克的土壤样品，加入事先灭菌好的装有100mL无菌水的250mL的三角瓶内，30℃恒温振荡200rpm，将菌胶团打碎，得泥水混合物，备用；S4：将泥水混合物转入装有100mL筛选培养基的500mL锥形瓶中，30℃恒温静置培养至培养基浑浊，得到菌悬液；S5：获得菌种；S6：单个菌种初筛；S7：接种到斜面培养基中，放入37℃的恒温培养箱中培养2～7天，得到枯草芽孢杆菌防治菌株再加入苹果植物苗。

技术领域

本发明涉及防治菌株实验技术领域，具体为一种植物病害生物防治菌株的筛选方法。

背景技术

果树在生长的过程中经常会受到病虫害的侵袭，轻则导致产量和果品质量下降，重则会使果树绝产和树体死亡，所以病虫害的防治问题绝对不可以忽视。

苹果的疫病如苹果霉心病，需要进行防治，而枯草芽孢杆菌通过成功定殖至植物根际、体表或体内，与病原菌竞争植物周围的营养，分泌抗菌物质以抑制病原菌生长，同时诱导植物防御系统抵御病原菌入侵，从而达到生防的目的。枯草芽孢杆菌主要可以抑制由丝状真菌等植物病原菌所引起的多种植物病害。现报道的从作物的根际土壤、根表、植株及叶片上分离筛选出的枯草芽孢杆菌菌株对不同作物的众多真菌和细菌病害具有拮抗作用。

但是有些芽孢杆菌在室内平板的拮抗效果很好，但是在实际果园土壤中却不能发挥相应的作用。因此，有必要开发和筛选出在根际定殖能力强兼有较强拮抗能力的新的菌株资源，从而为生物防控菌剂的开发提供新的微生物资源。

发明内容

本发明提供了一种植物病害生物防治菌株的筛选方法，具备与实际果园土壤更融合、加大际定殖能力和较强拮抗能力的有益效果，解决了上述背景技术中所提到实际果园土壤中根际定殖能力低和拮抗能力差的问题。

本发明提供如下技术方案：一种植物病害生物防治菌株的筛选方法，所述筛选方法包括以下步骤：

S1：筛选培养基，将4g/牛肉膏、10g/L蛋白胨、5G/L氯化钠、可溶性淀粉10.0g、蒸馏水1000ml和加入氧菌20g琼脂，将锭粉用少量蒸馏水调成糊状，再加入到融化好的培养基中，将培养基导入培养皿中；

S2：制备锭粉培养基后，进行紫外线灭菌20min；

S3：制备土壤稀释液，选取果园内、花坛地方的土样，铲产去表层，取5～15CMM处5克的土壤样品，加入事先灭菌好的装有100mL无菌水的250mL的三角瓶内，30℃恒温振荡200rpm，将菌胶团打碎，得泥水混合物，备用；

S4：将泥水混合物转入装有100mL筛选培养基的500mL锥形瓶中，30℃恒温静置培养至培养基浑浊，得到菌悬液；

S5：将得到菌悬液放置于30℃培养箱中使菌液吸附进培养基中培养1～3天，获得菌种；

S6：单个菌种初筛，观察菌落表面，若发现有杂菌，进行再一次地分离纯化；观察有锭粉圈的菌落，并测量淀粉圈的直径D，菌落直径r，计算D/r的比值，进而进行拍照，选择淀粉圈大的菌落作为后续实验的菌种；

S7：接种到斜面培养基中，放入37℃的恒温培养箱中培养2～7天，得到枯草芽孢杆菌防治菌株。

作为本发明所述一种植物病害生物防治菌株的筛选方法的一种可选方案，其中：在S2和S3步骤中间加入恒温振荡器进行培育。

作为本发明所述一种植物病害生物防治菌株的筛选方法的一种可选方案，其中：所述S1步骤中筛选培养基均含有2％可溶性锭粉的LB培养基的两种方案：