[发明专利]一种抗CA15-3蛋白的重组抗体

说明书

本发明涉及一种包含CA15‑3蛋白抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。所述结合蛋白活性强，与CA15‑3蛋白具有很高的亲和力，可广泛应用于CA15‑3蛋白的检测领域。

技术领域

本发明涉及免疫技术领域，具体而言，涉及一种抗CA15-3的重组抗体。

背景技术

乳腺癌(Breast Cancer)是妇女最常见的恶性肿瘤之一，对人类的健康和生存构成重大威胁，是世界各国面临的最重要的社会问题之一。如今，乳腺癌已占全身恶性肿瘤的7％-10％，其发病率呈逐年上升趋势，自1980年以来每年以3％的速度增长，特别是北美、西欧等发达国家，表现的尤为明显。由于乳腺癌的病因和发病机制较为复杂，至今未完全阐明，且其致病特点为发病年龄较低、早期多无症状、就诊时病期相对较晚、出现转移致存活期缩短，因此早期诊断、治疗成为提高患者生存率的关键。

乳腺癌的检查方法，包括乳腺红外线、B超、乳腺X线检查、MRI等，对于乳腺癌的诊断则有肿块穿刺活检及切除活检等方法。病理学检查具有很高的准确度，但由于是一种创伤性检查，往往不容易被患者接受。随着临床上血清肿瘤标志物的不断应用和普及，越来越多的肿瘤标志物逐渐被发现并应用于临床乳腺癌的诊断。由于血清肿瘤标志物检查的无创性和快捷性，逐渐得到患者的欢迎。目前将肿瘤标志物分为癌胚抗原标志物(CEA、AFP等)、糖类抗原(CA15-3、CA125、CA199等)、酶类标志物(PSA、NSE等)、激素类标志物(HGH、HCG等)、其它蛋白质类标志物(ferritin等)五类。其中糖类抗原标志物是指由肿瘤细胞表面抗原物质或是肿瘤细胞所分泌的物质，这类物质又是单克隆抗体，故又称糖类抗原，正常人体内含量极低，一般在肿瘤状态血清中可测得异常升高的糖类抗原。

CA15-3(MUC1)，即糖类抗原(Carcinoem-bryonic Antigen 153,CA15-3)，为抗粘蛋白1的单克隆抗体，属于粘液素族，mvc-1类基因编码的产物。其为1982年由Hikens等从人乳脂肪球(human milk fat globules,HMFG)膜McAbll5D8上糖蛋白MAM-6制成的小鼠单克隆抗体(115-DB)，1984年Kufu等用肝转移乳腺癌细胞膜成分McAbDF3制成单克隆抗体(DF-3)，故被命名为CA15-3。CA15-3为多形上皮粘蛋白,分子量为40kD,是乳腺癌相关抗原，位于肿瘤细胞表面，当细胞癌变时，细胞膜上蛋白酶和唾液酶活性增高，细胞骨架破坏，从而导致细胞抗原凋落，释放入血，使血清含量升高。CA15-3抗原存在于乳腺、肺、卵巢、胰腺的恶性肿瘤细胞和正常上皮，因此CA15-3不仅在恶性肿瘤如乳腺癌、卵巢癌、肺癌中可升高，在某些良性疾病中也应该有不同程度的升高。CA15-3是目前公认的对于乳腺癌诊断比较好的血清标志物之一,故从1997年起美国临床肿瘤学会推荐CA15-3作为乳腺癌预防、诊断、治疗以及随访的重要肿瘤标志物。

肿瘤标志物具有简便、无创、费用低等优点，已成为近年来肿瘤研究领域的重点。肿瘤标志物检测方法的研究层出不穷，分别有放射免疫分析法(RIA)、酶联免疫分析法(ELA)、时间分辨免疫分析法(TFIA)和化学发光免疫分析法(CLIA)、蛋白芯片检测方法、基因芯片检测方法等。其中CA15-3的检测方法通常为化学发光免疫分析法(CLIA)、酶联免疫分析法(ELA)等。化学发光与酶联免疫法皆可实现自动化、大批量、定量检测。上述两种检测CA15-3的方法都需要针对CA15-3的特异性单克隆抗体。

现有的CA15-3抗体由于活性低、亲和力差，无法很好地应用于CA15-3蛋白的检测中，且目前市场上用于检测CA15-3的单克隆抗体灵敏度或特异性上存在缺陷，因此本领域对于有效且特异性结合检测CA15-3并对其进行检测的抗体存在着强烈需求。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明涉及一种新颖的包含CA15-3抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。