[发明专利]一种鉴别榛属物种的DNA条形码及其扩增引物和应用

权利要求书

1.一种鉴别榛属物种的DNA条形码，其特征在于，所述DNA条形码为由榛属物种叶绿体基因组的以下4个高变区连接而成的序列：ndhF-rpl32、rpl32-trnL、ycf1和trnS-trnG，其中所述ndhF-rpl32表示基因ndhF和rpl32之间的非编码区，所述rpl32-trnL表示基因rpl32和trnL之间的非编码区，所述ycf1表示编码区基因ycf1，所述trnS-trnG表示基因trnS和trnG之间的非编码区。

2.根据权利要求1所述的DNA条形码，其特征在于，

用于扩增ndhF-rpl32的上下游引物分别如SEQ ID NO:3-4所示；

用于扩增rpl32-trnL的上下游引物分别如SEQ ID NO:5-6所示；

用于扩增ycf1的上下游引物分别如SEQ ID NO:7-8所示；

用于扩增trnS-trnG的上下游引物分别如SEQ ID NO:9-10所示。

3.用于鉴别榛属物种的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括：

用于扩增ndhF-rpl32的上下游引物，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:3-4所示；

用于扩增rpl32-trnL的上下游引物，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:5-6所示；

用于扩增ycf1的上下游引物，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:7-8所示；

用于扩增trnS-trnG的上下游引物，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:9-10所示。

4.用于鉴别榛属物种的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求3所述的引物组合。

5.权利要求1或2所述的DNA条形码、权利要求3所述的引物组合、或权利要求4所述的试剂盒在鉴别榛属物种中的应用。

6.一种鉴别榛属物种的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

S1)以不同待测样本的叶绿体DNA为模板，使用权利要求3所述的引物组合分别进行PCR扩增，得到以下4个高变区的PCR扩增产物：ndhF-rpl32、rpl32-trnL、ycf1和trnS-trnG；

S2)对步骤S1)得到的4个高变区的PCR扩增产物进行测序，分别得到不同待测样本的叶绿体DNA的4个高变区序列，并将不同待测样本的所述4个高变区序列按相同顺序拼接、校对，分别得到不同待测样本对应的DNA条形码；

S3)根据步骤S2)所得不同待测样本的DNA条形码进行聚类分析，以鉴别榛属物种。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤S1)中所述PCR扩增的反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性45s，60-50℃梯度复性1min，72℃延伸1min，30个循环；最终72℃延伸10min。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，步骤S3)中所述聚类分析为使用不同待测样本的DNA条形码构建ML系统发育树，若榛属物种分布于支持率不低于75％的不同分枝，则确定为不同种。