[发明专利]三个多肽及其在制备Ⅰ型糖尿病免疫防治疫苗或药物中的应用

说明书

本发明公开了三个多肽及其在制备Ⅰ型糖尿病免疫防治疫苗或药物中的应用，利用高糖和经典ERS诱导剂毒胡萝卜素诱导胰岛β细胞系NIT‑1产生ERS，高分辨率高通量质谱分析技术鉴定ERS态和稳态NIT‑1细胞MIPs，生物信息学技术分析比对其差异，选取ERS态NIT‑1细胞特有或表达上调的肽作为候选肽，利用T1D的模型小鼠NOD小鼠，通过一系列体内外生物学实验对候选肽进行筛选，得到三个有良好免疫原性的肽SYT12subgt;291‑299/subgt;，OTUB2subgt;58‑66/subgt;和SLC35B1subgt;26‑34/subgt;。这三个多肽可以被NOD小鼠体内CD8supgt;+/supgt; T细胞识别，可能作为免疫防治T1D的潜在靶标。

技术领域

本发明属于免疫识别和治疗技术领域，涉及三个多肽及其在制备Ⅰ型糖尿病免疫防治疫苗或药物中的应用。

背景技术

Ⅰ型糖尿病(T1D)是一种器官特异性自身免疫性疾病，主要由抗原特异性T细胞攻击破坏胰岛β细胞，导致胰岛素合成绝对不足所致。T1D的发病率逐年递增，发病年龄呈现年轻化，并发症很多，致使儿童及青少年致残甚至早亡，目前尚无治愈方法。近年来研究表明自身反应性CD8⁺T细胞是参与T1D启动和发展的关键因素。自身反应性CD8⁺T细胞依赖其T细胞抗原受体(TCR)特异性识别胰岛β细胞表面主要组织相容性复合体I(MHC-Ⅰ)类分子提呈的自身抗原肽而活化，直接破环β细胞。然而早期驱动自身反应性CD8⁺T细胞活化的自身抗原谱尚未完全解析。所有的有核细胞均表达MHC-Ⅰ类分子，与MHC-Ⅰ类分子结合的所有肽的总和称为MHC-Ⅰ类分子相关肽组(MIPs)。MIPs具有高度的复杂性和可塑性，很多因素都可以重塑MIPs，产生的MHC-Ⅰ类分子相关抗原肽可能成为CD8⁺T细胞识别及应答的主要靶标。

内质网的主要功能是负责新合成蛋白的转录后修饰，折叠和组装。各种体内外因素都可以干扰内质网的正常功能，引起未折叠蛋白在内质网内大量聚集，激活未折叠蛋白反应，称为内质网应激(ERS)。β细胞是内分泌性细胞，拥有非常丰富的内质网系统来折叠，加工新合成的胰岛素，因此对于ERS异常敏感。近年来的研究表明：ERS是早期T1D发病的重要病理机制。多种环境因素，包括细胞因子，病毒感染，高血糖等均可以诱导β细胞内发生ERS，产生系列新生抗原肽，与β细胞内MHC-I类分子结合并呈递至细胞表面被自身反应性CD8⁺ T细胞识别为“非我”而加以应答，攻击胰岛β细胞，启动胰岛炎及T1D的发生。

引起ERS的因素很多，如营养过剩、高血糖，病毒感染、炎症，化学诱导剂等。现代人生活中糖的摄入量普遍增高，各种甜品，含糖饮料为大众所喜欢，尤其是青少年和儿童糖的摄入量更高，有流行病学调查显示，高糖的摄入可以增加儿童易感人群T1D的发病率，但目前仍缺乏充足的实验室证据。因此我们推测高糖的摄入使胰岛素的需求量大大增加，增加胰岛β细胞的负担，诱导病理性ERS的发生，产生新的抗原肽参与T1D的发病。对ERS诱导的抗原肽及CD8⁺T细胞免疫识别及活化机制的研究，有助于从全新角度深入理解T1D的发病机制，并可能发现全新的免疫治疗靶点。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供三个多肽及其在制备Ⅰ型糖尿病免疫防治疫苗或药物中的应用。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、三个多肽，即多肽SYT12_291-299、OTUB2_58-66或SLC35B1_26-34，它们的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1～3所示。

SYT12_291-299：SYLPTAERL，如SEQ ID NO.1所示；

OTUB2_58-66：SYLESLLGK，如SEQ ID NO.2所示；