[发明专利]金香194菌株特异性分子标记引物、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了金香194菌株特异性分子标记引物、试剂盒及其应用，所述引物对命名为PF3‑R1；其上游引物序列为:5’‑GGAGAGGGAGAGAGAAAACGA‑3’；下游引物序列为:5’‑AGAGAGGGAAGAGGAGAAGAG‑3’。本发明的分子标记引物对PF3‑R1特异性强，能够对香菇菌株金香194的基因组DNA进行特异扩增，而对其他香菇菌株无扩增作用，利用特异性分子标记引物对PF3‑R1，可快速、准确的鉴别香菇菌株金香194。

【技术领域】

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及金香194菌株特异性分子标记引物、试剂盒及其应用。

【背景技术】

香菇菌株金香194是由申请人自行选育获得的新菌株。该菌株与现有的香菇菌株相比，具有耐碱能力强、抗霉菌能力好的特性，经过实验发现该菌株的菌丝生长的酸度范围为pH4-11，最适宜pH为4-8，耐碱性能力远高于现有推广栽培的香菇品种；该菌株在用石灰调节pH至9的培养料中菌丝生长旺盛，菌棒杂菌感染率低，菌棒成功率达97-100％的优势，目前，香菇菌种的鉴定一般是从形态、性状和生理特性上进行鉴定，而香菇菌株易受种植环境以及人为主观因素的影响，导致香菇菌种鉴定并不准确。因此，研究出香菇菌株金香194的有效鉴别方法，对于该菌株的进一步遗传改良研究和生产上的推广栽培均具有重要意义。

本发明意在原有ISSR遗传差异分析的基础上，设计特异引物，建立了金香194的特异性分子标记，并利用该分子标记可以简单、快速、明了地鉴别该菌株。

【发明内容】

本发明克服了现有技术中以形态、性状和生理特性上进行鉴定香菇菌种，鉴定结果不稳定、不准确的技术问题，提供金香194菌株特异性分子标记引物、试剂盒及其应用。

为解决上述问题，本发明采取如下技术方案：

金香194菌株特异性分子标记引物对，所述引物对命名为PF3-R1；

其上游引物序列为:5’-GGAGAGGGAGAGAGAAAACGA-3’；

下游引物序列为:5’-AGAGAGGGAAGAGGAGAAGAG-3’；

所述金香194香菇(Lentinula edodes)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.40137，保藏日期为2022年04月24日。

本发明还包括一种试剂盒，所述试剂盒包含所述引物对。

一种利用所述引物对从多个香菇菌株中鉴别出香菇菌株金香194的方法，所述方法为：提取待鉴别香菇菌株的总DNA，利用所述引物对PF3-R1进行PCR扩增，当扩增出345bp片段时即判定该菌株为香菇菌株金香194；所述香菇菌株金香194的保藏编号为：CGMCCNo.40137。

进一步的，所述PCR扩增的反应程序为：95℃预变性5min，95℃变性30s、60℃复性30s、72℃延伸50s、循环25次，72℃补平7min，4℃保存；所述PCR扩增时采用的PCR反应体系以20μL计为：2×Es TaqMasterMix 10μL、ddH₂O 7μl、10μmol/L上游引物1μl、10μmol/L下游引物1μl、待测香菇菌株基因组DNA1μL。

进一步的，所述引物对PF3-R1扩增出特异性片段的核酸序列如序列表SEQ ID NO:3所示。

本发明与现有技术相比较具有以下有益效果：本发明的引物对PF3-R1特异性强，能够对香菇菌株金香194提取的DNA进行特异扩增，并能扩增出345bp片段，而对其他香菇菌株无扩增作用。利用引物对PF3-R1，依照本申请的分子标记筛选鉴定方法可简便、快速、准确的筛选鉴定香菇菌株金香194，对香菇菌株金香194的市场推广有重要的意义。

【附图说明】