[发明专利]一种细胞角蛋白19片段特异性结合短肽及用途

说明书

本发明属于蛋白质短肽技术领域，公开了一种细胞角蛋白19片段特异性结合短肽及用途。细胞角蛋白19片段是公认的特异性、敏感性都较高的肿瘤标记物，在非小细胞肺癌的早期诊断、疗效监测和预后判断过程中均发挥着重要的作用。本发明涉及一种通过噬菌体展示技术获得细胞角蛋白19片段短肽Y10的方法。所述短肽Y10的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所筛选出的特异性短肽，具有相对分子质量小、亲和力高的特点，由此可以设计探针用于检测细胞角蛋白19片段，为临床上肿瘤的早期诊断和靶向药物的研发提供了新方向。

技术领域

本发明属于蛋白质技术领域，涉及一种细胞角蛋白19片段特异性结合短肽及用途。

背景技术

细胞角蛋白19片段是一种可溶性的蛋白质，当肿瘤细胞被破坏或者凋亡时其将被释放到人的体液中，故其含量与体内肿瘤负荷高低直接相关。其主要来源于肺癌、食管癌等上皮细胞起源的肿瘤细胞的胞质内。细胞角蛋白19片段是非小细胞肺癌的首选标志物，特别是鳞状上皮细胞癌首选的肿瘤标志物，灵敏度可达60％，特异性可达95％。

细胞角蛋白19片段是公认的特异性、敏感性都较高的肿瘤标记物，在非小细胞肺癌的早期诊断、疗效监测和预后判断过程中均发挥着重要的作用。当前检测细胞角蛋白19片段的技术手段主要依赖于酶联免疫吸附测定、化学发光及放射免疫分析等检测方法，这些检测方法普遍存在特异性差、假阳性，同时操作复杂，造成检测时间长的缺点。因此，需要设计一种高灵敏度和高特异性的方法来检测细胞角蛋白19片段。

发明内容

针对现有技术上存在的不足，本发明目的是在于提供一种可特异性识别细胞角蛋白19片段的短肽，是一种能与细胞角蛋白19片段特异性结合的短肽序列。

为了实现上述目的，本发明通过如下技术方案来实现：

一种癌胚抗原特异性结合短肽，命名为Y10，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：QSYFNACWSCNH。

本发明采用噬菌体展示技术以细胞角蛋白19片段蛋白为靶标，进行“洗脱-结合-扩增”，获得能与细胞角蛋白19片段特异性结合的短肽Y10。可利用分子相互作仪(Fortebio)技术定量验证短肽Y10与细胞角蛋白19片段的结合力。

所述的一种细胞角蛋白19片段特异性结合短肽可用于检测细胞角蛋白19片段的探针设计和靶向治疗药物的研制。

本发明的有益效果：

本发明利用了噬菌体展示技术筛选与细胞角蛋白19片段特异结合的短肽，鉴定了其具有高特异性和亲和力，同时该短肽还具备相对分子质量小、亲和力与特异性高等优点，在肿瘤标志物细胞角蛋白19片段的早期诊断、筛查和靶向治疗中发挥重要作用。

附图说明

图1是M13噬菌体随机短肽文库筛选细胞角蛋白19片段的实验流程图。

图2是噬菌体结合克隆与角蛋白片段19的ELISA检测结果图。

图3是短肽与细胞角蛋白19片段结合活性示意图。

具体实施方式

以下结合附图，通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。以下提供了本发明实施方案中所使用的具体材料及其来源。但是，应当理解的是，这些仅仅是示例性的，并不意图限制本发明，与如下试剂和仪器的类型、型号、品质、性质或功能相同或相似的材料均可以用于实施本发明。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实例1利用噬菌体展示技术对细胞角蛋白19片段进行三轮淘选

结合肽的生物淘选，流程图见图1。