[发明专利]一种纳米载体、纳米颗粒及制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种纳米载体、纳米颗粒及制备方法和应用，属于生物医药技术领域；所述纳米载体包括壳聚糖和共价修饰在所述壳聚糖表面的CRGDV多肽。本发明的纳米载体对缺血组织较高的靶向性，能够作为治疗下肢动脉硬化闭塞症的基因载体，同时本发明的纳米载体还具有良好的组织相容性和较低的细胞毒性，为临床上严重肢体缺血疾病的治疗提供了新的思路。本发明的纳米颗粒通过有效地促进毛细血管和小动脉生成从而增加肢体血流灌注，减轻缺血肢体组织坏死，改善肢体活动能力。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种纳米载体、纳米颗粒及制备方法和应用。

背景技术

外周动脉疾病(PeripheryArtery Disease，PAD)是一种由动脉粥样硬化所引起的慢性进展性疾病，以大、中动脉的管腔进行性狭窄或闭塞为特征，其发病率和死亡率均较高，且患者生活质量严重降低、预期寿命缩短。相对于上肢动脉，下肢动脉发病率更高，以下肢动脉硬化闭塞症(Arteriosclerosis Obliterans，ASO)多见，表现出间歇性跛行、静息痛、溃疡或坏疽等一系列肢体灌注不足的症状。

目前针对ASO的主要治疗手段包括传统的手术治疗和近年来新兴的腔内治疗技术，两者各有利弊。相比于单纯的球囊扩张或者支架置入，经皮机械性斑块切除术(Percutaneous Mechanical Atherectomy，PMA)联合药涂球囊(Drug-Coated Balloon，DCB)不但治疗效果较好，而且为再狭窄后的二次补救治疗留有余地。即便如此，PMA联合DCB术后再狭窄的风险仍然较高，并且存在弥漫性病变、流出道条件较差或合并有糖尿病的患者，通常无法进行腔内或传统手术治疗，药物治疗的效果也往往不尽人意。在此情况下，基因治疗则不失为一种可行的方法。

现有技术公开了经精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)修饰的CH纳米粒子包载pVEGF₁₆₅治疗后肢缺血模型小鼠，毛细血管内皮和周围组织中VEGF表达增高，进而能够促进新生毛细血管生成。然而，RGD-X多肽序列是多种细胞外基质蛋白结构和血浆蛋白结构所共有的高度保守氨基酸序列，修饰有RGD的纳米粒子对于肢体缺血组织的靶向性有待提高。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种纳米载体、纳米颗粒及制备方法和应用，本发明的纳米载体对肢体缺血组织的靶向性高。

本发明提供了一种纳米载体，包括壳聚糖和共价修饰在所述壳聚糖表面的CRGDV多肽。

优选的，还包括氢键结合在所述壳聚糖表面的八聚精氨酸。

本发明还提供了上述方案所述的纳米载体的制备方法，包括以下步骤：

将壳聚糖和丙烯酰氯混合，进行偶联反应，得到壳聚糖-丙烯酰氯；

将所述壳聚糖-丙烯酰氯和CRGDV多肽混合，进行迈克尔加成反应，得到所述纳米载体。

优选的，所述迈克尔加成反应后还包括：将所述迈克尔加成反应得到的表面修饰有CRGDV多肽的壳聚糖和八聚精氨酸混合，进行偶联反应，获得纳米载体。

本发明还提供了一种靶向性载治疗基因的纳米颗粒，包括上述方案所述纳米载体或者所述制备方法制备得到的纳米载体，和包载在所述纳米载体上的编码基因，所述编码基因包括血管内皮细胞生长因子编码基因和肝细胞生长因子编码基因。

优选的，所述血管内皮细胞生长因子编码基因和肝细胞生长因子编码基因的质量比为(0.5～1)：(0.5～1)。

优选的，所述编码基因和纳米载体的质量比为1：(50～51)。

本发明还提供了上述方案所述纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

将所述纳米载体、血管内皮细胞生长因子编码基因和肝细胞生长因子编码基因混合，进行纳米自组装反应，得到所述纳米颗粒。