[发明专利]一种免疫活化微颗粒的制备方法、药剂及其应用

说明书

本发明公开了一种免疫活化微颗粒的制备方法、药剂及其应用，属于肿瘤治疗技术领域，本发明利用基因编辑技术，设计一种可使宿主细胞的细胞膜上过表达趋化因子和细胞因子的重组质粒，将其包装成慢病毒颗粒后感染宿主细胞，使趋化因子和细胞因子同时在宿主细胞的细胞膜表面过表达。对其进行放疗后，得到膜上同时携带有趋化因子和细胞因子微颗粒，所述免疫活化微颗粒，可有效募集和活化免疫细胞，激活机体的抗肿瘤免疫反应，实现抑制肿瘤进展。并且所述免疫活化微颗粒来源于自体原代肿瘤细胞，具有良好的安全性。所述免疫活化微颗粒可实现多种类型趋化因子和细胞因子的组合，且可通过负载化疗药物或靶向药物来实现与化疗或靶向治疗的联合。

技术领域

本发明属于肿瘤治疗技术领域，具体涉及一种免疫活化微颗粒的制备方法、药剂及其应用。

背景技术

放射治疗是目前肿瘤治疗的最主要治疗手段之一，已被广泛应用于多种类型良恶性肿瘤的治疗。研究表明，50％以上的肿瘤患者在治疗期间需要进行放疗或放疗联合其他治疗方法。放射治疗主要通过直接或间接损伤肿瘤细胞的DNA来抑制肿瘤生长。然而，在临床上，有部分类型疾病如肺癌恶性胸腔积液、卵巢癌恶性腹水等不将放射治疗作为常规治疗手段，其原因在于对该类疾病放疗时，射线所照射的面积过大，易产生严重的不良反应。

基因编辑是指对生物体的基因组进行精确编辑的一种基因工程技术，具体包括ZFNs(Zinc-finger nucleases)技术、TALENs(Transcription activator-like effectornucleases)技术、CRISPR/Cas9技术和BE(Base editing)及PE(Prime editing)技术。目前，基因编辑技术的应用领域十分广泛，包括新型模式动物构建、遗传病治疗、基因工程药物和肿瘤治疗等等。目前，以CRISPR/Cas9技术为代表的基因编辑技术在治疗人类遗传性疾病或肿瘤治疗方面具有十分广阔的前景。然而，该应用目前仍处于发展阶段，其可能存在的潜在风险目前尚未完全明确。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种免疫活化微颗粒的制备方法、药剂及其应用。所述免疫活化微颗粒膜上同时携带趋化因子和细胞因子，因此，可募集和活化免疫细胞来激活机体的抗肿瘤免疫反应以实现抗肿瘤，解决部分肿瘤无法使用放疗手段和局部化疗疗效不佳等技术问题。

本发明的一个目的在于提供一种免疫活化微颗粒的制备方法。

一种免疫活化微颗粒的制备方法，所述免疫活化微颗粒膜上同时携带趋化因子和细胞因子，具体制备包括如下步骤：

S1、分别构建可细胞膜过表达趋化因子和细胞因子的重组质粒；

S2、分别将可细胞膜过表达趋化因子的重组质粒和可细胞膜过表达细胞因子的重组质粒包装成慢病毒颗粒；

S3、获得离体肿瘤细胞并进行细胞培养，得到原代肿瘤细胞；

S4、将步骤S2中获得的可细胞膜过表达趋化因子的慢病毒颗粒对步骤S3中得到的原代肿瘤细胞进行感染，得到可细胞膜过表达趋化因子的原代肿瘤细胞；

S5、将步骤S2中获得的可细胞膜过表达细胞因子的慢病毒颗粒对步骤S4中得到的可细胞膜过表达趋化因子的原代肿瘤细胞进行感染，得到可同时细胞膜过表达趋化因子和细胞因子的原代肿瘤细胞；

S6、对步骤S5中获得的可同时细胞膜过表达趋化因子和细胞因子的原代肿瘤细胞进行X线照射，并收集放疗后的细胞上清液；

S7、将步骤S6中获得的细胞上清液进行梯度离心，即可得到膜上同时携带趋化因子和细胞因子的免疫活化微颗粒。

进一步地，所述趋化因子选自CXCL9、CXCL10和CCL19中的一种。

进一步地，所述细胞因子选自IL-2、IL-15和IL-21中的一种。