[发明专利]一种胰岛素分泌型基因工程细胞药物的制备方法在审
| 申请号： | 202210904668.3 | 申请日： | 2022-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN116004680A | 公开（公告）日： | 2023-04-25 |
| 发明（设计）人： | 孙博;肖忠党;李裕民 | 申请（专利权）人： | 东南大学 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K38/28;A61K35/545;A61P3/10 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 王艳 |
| 地址： | 211102 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 胰岛素 分泌 基因工程 细胞 药物 制备 方法 | ||
1.一种胰岛素分泌性组合基因，其特征在于，所述胰岛素分泌性组合基因的序列如SEQID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ IDNO：7、SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：9所示。
2.含有权利要求1所述的胰岛素分泌性组合基因的表达盒、重组载体、重组细胞或慢病毒。
3.权利要求1所述的胰岛素分泌性组合基因、权利要求2所述的表达盒、重组载体、重组细胞或慢病毒在制备基因重组胰岛素相关治疗药物中的应用。
4.一种胰岛素分泌型细胞药物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)构建葡萄糖敏感的含有细胞系特异性启动子的胰岛素合成基因AP2-hINS-P2A或α-ACTIN-hINS-P2A或PCK1-hINS-P2A；
2)将胰岛素合成基因AP2-hINS-P2A或α-ACTIN-hINS-P2A或PCK1-hINS-P2A转染干细胞形成依次对应的AP2-hINS-P2A基因重组干细胞、α-ACTIN-hINS-P2A基因重组干细胞或PCK1-hINS-P2A基因重组干细胞；
3)AP2-hINS-P2A基因重组干细胞分化为含有AP2-hINS-P2A重组基因终端功能性脂肪细胞即为胰岛素分泌型细胞药物；α-ACTIN-hINS-P2A基因重组干细胞分化为含有A-ACTIN-hINS-P2A重组基因终端功能性骨骼肌细胞即为胰岛素分泌型细胞药物；PCK1-hINS-P2A基因重组干细胞分化为含有PCK1-hINS-P2A重组基因终端功能性骨骼肌细胞即为胰岛素分泌型细胞药物。
5.根据权利要求4所述的胰岛素分泌型细胞药物的制备方法，其特征在于，所述胰岛素合成基因AP2-hINS-P2A的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述胰岛素合成基因α-ACTIN-hINS-P2A的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；所述胰岛素合成基因PCK1-hINS-P2A的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示。
6.根据权利要求4所述的胰岛素分泌型细胞药物的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述干细胞包括胚胎干细胞、诱导多潜能干细胞或成体干细胞中的一种或几种。
7.根据权利要求4所述的胰岛素分泌型细胞药物的制备方法，其特征在于，所述方法还包括在AP2或α-ACTIN或PCK1基因前增加糖敏感序列G1，所述G1的序列如下：5’-CACGGGGCACTCCCGTGGTTCCTGGACTCTGGCCCC-3’。
8.根据权利要求7所述的胰岛素分泌型细胞药物的制备方法，其特征在于，所述G1序列重复3-5次。
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