[发明专利]tRNA衍生物tRF-His-008在诊断、治疗肾癌中的应用

说明书

本发明公开了一种tRNA片段tRF‑His‑008在诊断、治疗肾癌中的应用，通过荧光定量PCR法发现tRF‑His‑008在肾癌组织中表达显著低表达，且tRF‑His‑008在肾癌细胞中的表达水平显著低于人肾皮质近曲小管上皮细胞系HK2，且tRF‑His‑008在肾癌患者血液外泌体中检测到其表达水平与肾癌组织表达水平正相关；tRF‑His‑008过表达后能够显著抑制肾癌增殖、迁移、侵袭；采用tRF‑His‑008抑制物靶向抑制tRF‑His‑008会显著促进肾癌细胞的增殖、迁移、侵袭。tRF‑His‑008在肾癌诊断及治疗方面具有重要的作用，可以作为肾癌诊断生物标志物及治疗制剂。

技术领域

本发明属于肿瘤诊断及生物医药工程领域，涉及一种内源性tRNA衍生物的新用途，具体涉及tRNA衍生物tRF-His-008在诊断和治疗肾癌中的应用。

背景技术

肾细胞癌(Renal cell carcinoma,RCC)是肾癌最常见类型，起源于肾皮质内，约占原发性肾癌的85％，在所有成人恶性肿瘤中占比超4％，是常见的泌尿系统恶性肿瘤。美国癌症协会预估2022年全美肾癌新发病例将达79000例，肾癌死亡病例将达到13920例。RCC最常见的病理类型是透明细胞性肾细胞癌(ccRCC)，占所有RCC的75-80％。早期ccRCC患者行部分肾切除术或根治性切除术可获得良好的预后，5年生存率达90％以上。但是ccRCC由于早期缺乏典型临床症状，四分之一的患者在初次诊断时便被发现有远处转移。而转移性ccRCC对化疗及放疗均不敏感，其5年总生存率仅为12％。目前晚期ccRCC主要依赖于靶向药物治疗和免疫治疗，但患者在接受6到15个月的靶向治疗后会出现耐药。因此转移性ccRCC的机制是目前肿瘤研究中的热点问题，深入研究ccRCC转移机制可为晚期转移性ccRCC的诊治提供新的思路，对改善其预后具有重要意义。

转运RNA(transfer RNA，tRNA)衍生片段(tRNA-derived fragment，tRF) 是近年来小非编码RNA(sncRNA)一个研究热点，它可以影响多种癌细胞的生物学行为。并且，一些研究发现，有些tRF可能是潜在的癌症诊断指标和治疗靶点。

外泌体是由脂质双层膜包围的纳米级(30-150nm)细胞外囊泡。外泌体是由内泌体途径产生的，可以被大多数类型的细胞释放到体液中。外泌体携带大量特异性的蛋白质以及功能性的DNA、mRNA、miRNA和环状RNA等，在体内参与细胞通讯、细胞迁移、促血管新生等生理过程，与包括肿瘤在内多种疾病的发生与进程密切相关。外泌体分布在外周血、尿液、唾液、乳汁、腹水、羊水等体液中，外泌体的各个组分既可以成为疾病诊断的标志物，又可作为疾病治疗的特异性靶点。

本发明通过4对配对肾癌及癌旁组织进行tRF高通量测序并在21对配对的肾癌及癌旁组织进行验证，发现tRNA衍生片段(tRF-His-008)在肾癌组织显著低表达，首次发现tRF-His-008与肾癌的关系及其在肾癌转移中的作用。本发明通过功能实验，证实了过表达tRF-His-008抑制肾癌增殖和转移，抑制tRF-His-008 表达可以促进肾癌增殖和转移。而且tRF-His-008存在于肾癌细胞培养液及肾癌患者血液外泌体中。本发明提供了一种肾癌的诊断标记物和治疗物，具有重要的临床应用价值。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种tRF-His-008在肾癌诊治中的应用，确定了 tRF-His-008是肾癌患者癌组织及血液外泌体中表达下调的tRF，并将tRF-His-008 应用到肾癌的诊断和治疗中。

本发明的另一个目的在于提供一种用于诊断肾癌疾病的试剂盒。

本发明的第三个目的在于提供一种治疗肾癌的药物。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

tRF-His-008作为诊断标志物在制备用于诊断肾癌试剂中的应用，所述 tRF-His-008的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。