[发明专利]一种PCR扩增引物对及其应用

说明书

本发明属于细菌检测技术领域，具体涉及一种PCR扩增引物对及其应用，尤其适用于对耐热芽孢杆菌的检测。该PCR扩增引物对的上游引物包含如SEQIDNO：1所示序列，下游引物包含如SEQIDNO：2所示序列；该PCR扩增引物对在检测耐热芽孢杆菌时，特异性强，可以有效与耐热芽孢杆菌发生特异性扩增，不会出现假阳性；并且基于该PCR扩增引物对的实时荧光PCR扩增检测方法检测步骤简单，检测时间短，对耐热芽孢杆菌的检测限可以达到2.8CFU/mL，灵敏度高。

技术领域

本发明属于细菌检测技术领域，具体涉及一种PCR扩增引物对及其应用，尤其适用于对耐热芽孢杆菌(Bacillus sporothermodurans)的检测。

背景技术

芽孢杆菌是一类能形成芽孢的杆菌或球菌，芽孢杆菌根据菌种不同，其耐热性也不同，有的甚至能耐受100℃及以上的高温，一般来说能够耐受巴氏杀菌温度的芽孢杆菌为耐热芽孢杆菌。耐热芽孢杆菌(Bacillus sporothermodurans(BSTD))就是一种典型的比较耐热的芽孢杆菌，是一类具有较高耐热性能的产内生孢子的细菌，该菌种是细菌界、厚壁菌门、杆菌纲、芽孢杆菌目、芽孢杆菌科、芽孢杆菌属、BSTD种，该菌种的模型菌种编号为M215(DSMZ10599)。

1985年和1990年，在德国的超高温杀菌处理(ultraheattreated，UHT)的牛奶中发现BSTD，随后在欧洲的其他国家(如比利时、法国和西班牙等)也相继被发现。耐热芽孢杆菌在一些食品或环境中可能存活并繁殖；一些BSTD不会明显改变牛奶品质也不具有致病性，容易被忽视，虽然这些BSTD不具有致病性，也不会给产品带来显著的品质降低，但是其在环境和食品中广泛存在，特别是在乳制品的检出能够反映出产品的生产过程存在瑕疵，给食品安全带来潜在的风险；而且被忽略后很大可能造成企业生产线的全线污染，对企业造成极大的经济损失，且该菌被污染后很难被去除；除此之外，有些BSTD还可能会产生毒素而且具有致病性，给食品安全带来更大的隐患。所以，企业尤其是食品企业需要对BSTD有全面深入的认识，从而帮助企业建立更加完善的微生物控制体系。

目前，国内还没有系统的方法对BSTD进行检测，常用的检测方法有平板培养法以及PCR鉴定法；传统的固体平板需对该菌培养48-72h左右，随后通过肉眼进行观察；然而该菌在平板上的菌落形态极不明显，通过肉眼观察很大可能被忽略而造成企业生产线的全线污染；现有PCR鉴定通常使用细菌通用引物27F和1492R，特异性不强，准确性不高，灵敏度不强，测序结果可能出现假阳性。

因此，一种准确性高和灵敏度强的检测耐热芽孢杆菌方法是有必要的。

发明内容

为了解决上述问题，本发明目的之一在于提供了一种PCR扩增引物对，该PCR扩增引物对对耐热芽孢杆菌有很强的特异性，使用该PCR扩增引物对可以通过PCR扩增检测方法对耐热芽孢杆菌进行定性和定量分析。

为了达到上述目的，可以采用以下技术方案：

本发明一方面提供了一种PCR扩增引物对，其上游引物可以包含如SEQIDNO：1所示序列，下游引物可以包含如SEQIDNO：2所示序列。

本发明另一方面提供了一种检测试剂，可以包括上述的PCR扩增引物对。

本发明再一方面提供了一种检测试剂盒，可以包括上述的PCR扩增引物对或上述的检测试剂。

本发明再一方面提供了一种上述的PCR扩增引物对或上述的检测试剂或上述的检测试剂盒在检测耐热芽孢杆菌中的应用。

本发明再一方面提供了一种耐热芽孢杆菌的PCR扩增检测方法，包括：将待检测样品与上述的PCR扩增引物对混合进行PCR扩增得PCR扩增产物，对PCR扩增产物进行分析，从而判断待检测样品中是否含有耐热芽孢杆菌。