[发明专利]抑制IL-25基因表达的siRNA及其应用

说明书

本发明公开了一种抑制IL‑25基因表达的siRNA及其应用，本发明提供的siRNA序列能够特异性敲降IL‑25表达水平，本发明还通过硫代修饰正义链，在没有明显增加细胞毒性的基础上，提高了siRNA在血清中抵抗酶水解的能力，延长作用时间，为治疗自身免疫性疾病带来重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种抑制IL-25基因表达的siRNA及其应用，属于生物医药技术领域。

背景技术

IL-25是白介素17家族的成员之一，又称IL-17E。人IL-25全长3987bp，位于14号染色体。它的受体是IL-17RB。IL-25主要作用于高表达MHC-II、低表达CD11c的非B/非T细胞；T细胞方面，Th2型记忆细胞、NKT细胞、CD14⁺细胞也是IL-25的靶细胞。在IL-25的刺激下，NF-kB活化因子1通过细胞内SEF1R结构域结合到IL-17RB上，激活NF-kB信号通路。IL-25还可以通过胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)与树突状细胞(DCs)之间的相互作用，促进IL-17RB的表达，增加Th2型记忆细胞的功能，发挥免疫调节作用。现有研究表明，IL-25会参与的免疫疾病至少包括银屑病、过敏性肺炎、类风湿性关节炎、变应性肉芽肿血管炎和自身免疫性糖尿病等。所以，IL-25是自身免疫性疾病的潜在治疗靶点。

siRNA的作用方式又称RNA干扰或RNAi。siRNA通常是19～25bp的双链RNA分子，其功能是诱发同源mRNA高效特异性降解，从而降低某个蛋白质的表达。细胞内存在的dsRNA，被Dicer酶(RNaseIII家族成员)识别后，剪切成siRNA片段，siRNA与细胞内其它蛋白质形成RNA介导的RISC复合物，该复合物去寻找与siRNA反义链同源的mRNA，在ATP作用下，Dicer酶使siRNA解螺旋，释放正义链，保留反义链，反义链与mRNA特异性互补配对，RISC迅速切割这条mRNA；由于该mRNA没有poly(A)尾巴和5’帽结构的保护，可被其它核酸酶快速水解，从而抑制了该条mRNA翻译成蛋白质。所以，siRNA特异性降低了mRNA水平甚至蛋白水平的表达。

siRNA在生物医药领域中的应用有两大难题。一个是序列特异性，另一个是易被核酸酶降解。siRNA序列可以容忍1～2个碱基与mRNA错配，但是出现3个及以上错配时，靶向其它非目标mRNA的几率大大增加，而且随着错配碱基的出现，siRNA的干扰效率也可能下降。即设计一条特异性强的siRNA是第一个要解决的问题。其次，体外递送siRNA进入体内，siRNA由于体内丰富的核酸酶，极易被降解代谢掉，或者产生不被期望的免疫刺激反应。将siRNA的序列进行化学修饰，能提高siRNA的稳定性，减轻负面的免疫刺激。常用的化学修饰主要包括磷酸骨架修饰、核糖修饰和碱基修饰。例如专利号CN 107904239 A中验证过，未修饰的siRNA-RB在30分钟后已明显降解，而经过化学修饰的siRNA-RB在30分钟内无明显的降解。即设计有效的siRNA修饰且不影响敲降水平的化学修饰方法是另一个要解决的问题。

目前，在RNAi领域中，通过FDA批准上市的几款siRNA药物，都属于Anlylam公司，换句话说，Anlylam公司占有siRNA药物市场的巨大份额，且siRNA药物研发速度快。第一款上市的药物是2018年8月FDA批准的patisiran，用于治疗转甲状腺素蛋白淀粉样变性(haTTR)引起的神经损伤。正义链和反义链各包含21个核苷酸。正义链的19个核苷酸与反义链的互补19个核苷酸杂交，从而形成19个核苷酸碱基对，并在每条链上留下两个3'-末端核苷酸作为未杂交的突出端，在修饰上Patisiran同时应用了2’-O-M和2’-O-Me修饰。后面陆续上市药物还有治疗急性肝卟啉症的givosiran及治疗原发性1型高草酸尿症药物Lumasiran。目前，国内圣诺医药正在加速治疗增生瘢痕的siRNA药物已经进入临床II期。目前尚未有治疗银屑病等自身免疫疾病的siRNA药物研发报道。本发明基于IL-25的基因序列特征设计合成的siRNA序列旨在能够特异性敲降IL-25基因表达水平，同时对序列进行修饰以解决siRNA在血清中的稳定性问题，并避免潜在的细胞毒性，以达到可有效地改善和治疗自身免疫性疾病的目标。

发明内容