[发明专利]一种无创性基因转染人类胚胎的方法

说明书

本发明提供一种无创性基因转染人类胚胎的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，收集人生殖细胞；S2，将人生殖细胞转移到装有电转缓冲液的电转管，电转缓冲液中含有目的基因，置于电穿孔仪进行电转，电转的参数为电压100‑155V、脉冲时间2‑4ms、脉冲数3‑5；S3，电转结束后，清洗人生殖细胞，放入含有组织培养油的培养基中培养。本发明的方法不需去处透明带，即可对人生殖细胞进行高效的转染，操作简单，同时一次性可以处理大量胚胎，效率高。

技术领域

本发明涉及一种无创性基因转染人类胚胎的方法，属于胚胎转染技术领域。

背景技术

近年来，基因治疗技术的科学研究和创新如雨后春笋般涌现。基因治疗(genetherapy)是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿缺陷和异常基因引起的疾病，以达到治疗目的。其中也包括转基因等方面的技术应用，也就是将外源基因通过基因转移技术将其插入病人的适当的受体细胞中，使外源基因制造的产物能治疗某种疾病。从广义说，基因治疗还可包括从DNA水平采取的治疗某些疾病的措施和新技术。基因治疗主要有两种形式：一是体细胞基因治疗；二是生殖细胞基因治疗。生殖细胞的基因治疗是将正常基因直接引入生殖细胞，以纠正缺陷基因。这样，不仅可使遗传疾病在当代得到治疗，而且还能将新基因传给患者后代，使遗传病得到根治。而精确的基因治疗需要将mRNA、引导RNA(gRNA)、蛋白质质粒等外源基因和序列有效地导入配子或受精卵胚胎。目前，有多种有效的基因传递方法，比如显微注射、电穿孔、病毒感染和转染，但是这些方法存在一些缺点：由于人胚胎细胞被透明带包围，这些方法很难将外源基因和序列导入胚胎细胞，因此需要去除透明带，但是去除透明带需要酶消化，酶消化往往会损伤胚胎的正常发育；病毒感染和转染的方法存在一定的毒性，显微注射技术是非常耗时且需要特殊技能。上述方法的缺点阻碍了基因治疗的发展。

发明内容

本发明提供了一种无创性基因转染人类胚胎的方法，可以有效解决上述问题。

本发明是这样实现的：

一种无创性基因转染人类胚胎的方法，包括以下步骤：

S1，收集人生殖细胞；

S2，将人生殖细胞转移到装有电转缓冲液的电转管，电转缓冲液中含有目的基因，置于电穿孔仪进行电转，电转的参数为电压100-155V、脉冲时间2-4ms、脉冲数3-5；

S3，电转结束后，清洗人生殖细胞，放入含有组织培养油的培养基中培养。

在一些实施例中，所述人生殖细胞为GV卵子、受精卵、胚胎二细胞时期细胞中的一种。

在一些实施例中，所述人生殖细胞不去除透明带。

在一些实施例中，所述目的基因为外源mRNA、外源gRNA、质粒中的一种。

在一些实施例中，所述培养基为G1培养基。

在一些实施例中，所述培养的条件为6％CO₂，37℃。

本发明的有益效果是：

本发明采用电穿孔对人生殖细胞进行基因转染，不需去除透明带，即可对人生殖细胞进行高效的转染，操作简单，同时一次性可以处理大量胚胎，效率高，同时避免去除透明带的传统方法中酶消化对胚胎发育的损伤。

本发明采用电穿孔进行基因转染，对人胚胎没有伤害，避免了常规的病毒感染和转染的方法的毒性造成人胚胎的畸形。

本发明采用电穿孔进行基因转染避免显微注射带入的更多的液体，不需要特殊技能即可操作，方便操作。

附图说明