[发明专利]一种ATP7B基因致病突变体及其在制备Wilson病诊断试剂盒中的应用

说明书

本发明涉及基因诊断技术领域，特别是涉及一种ATP7B基因致病突变体及其在制备Wilson病诊断试剂盒中的应用。本发明通过外显子组测序技术首次发现了c.526_527insA和c.2305_2306insC位点复合杂合突变可以导致Wilson病，利用该复合杂合突变制备的诊断试剂或试剂盒，可以特异性区分Wilson病患者、携带者和正常人群，可用于快速、有效地预测或诊断Wilson病，可以提供优生优育和治疗干预指导。另一方面，本发明提供的ATP7B基因致病致病突变体可以为Wilson病的药物筛选、药效评价及靶向治疗提供新的技术支持。

技术领域

本发明涉及基因诊断技术领域，特别是涉及一种ATP7B基因致病突变体及其在制备Wilson病诊断试剂盒中的应用。

背景技术

Wilson病又称肝豆状核变性(MIM 277900)，是一种常染色体隐性遗传的铜代谢障碍性疾病，以铜代谢障碍引起的肝硬化、基底节损害为主的脑变性疾病为特点，以不同程度的肝细胞损害、脑退行性病变和角膜边缘有铜盐沉着环为临床特征。该病也是少数几种可治的神经遗传病之一，关键是早发现、早诊断、早治疗。

Wilson病致病基因ATP7B(MIM 606882)定位于染色体13q14.3，基因全长79.5kb，包含21个外显子和20个内含子，编码1466个氨基酸组成的铜转运P型ATP酶，参与铜的跨膜转运，ATP7B蛋白一方面转运铜至反高尔基体网络并与铜蓝蛋白前体结合、形成功能性的全铜蓝蛋白入血；另一方面转运铜至胆汁以便排泄。ATP7B蛋白主要在肝脏表达，当ATP7B基因突变导致ATP7B蛋白对铜的转运功能障碍时，铜在肝脏过量沉积，引起肝细胞线粒体氧化应激反应并对脂质、蛋白质、DNA和RNA等分子造成损伤，导致肝细胞损伤、肝脏脂肪变性；铜还可激活肝星状细胞，加速肝纤维化进程。当铜超过了肝脏储存容量，就会以游离铜的形式进入血液，并在脑部、肾脏、角膜、关节以及肠道等部位过量沉积，产生肝脏外的铜毒性，引起相应的临床表现。

人类基因数据库已公开了数百个ATP7B基因突变位点，其中绝大部分在Wilson病发病中具有明确致病作用。欧洲Wilson病患者人群中最常见的突变为p.His1069Gln，突变频率为13％～61％；亚洲人群的常见突变为p.Arg778Leu，突变频率为34％～38％。我国Wilson病患者有3个高频致病突变p.Arg778Leu、p.Pro992Leu和p.Thr935Met，占所有致病突变的50％～60％；相对常见的致病突变还有p.Ala874Val、p.Ile1148Thr、p.Gly943Asp、p.Gln511X、p.Arg919Gly、p.Asn1270Ser、p.Arg778Gln等。

基因突变是导致疾病发生发展的重要遗传基础，基因诊断是确诊Wilson病的金标准。临床上需要针对不同突变建立相应的检测技术并用于明确病因和疾病诊断。但目前并没有能特异性区分Wilson病患者、携带者和正常人群的诊断试剂盒的报道。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种ATP7B基因致病突变体及其在制备Wilson病诊断试剂盒中的应用。利用本发明提供的ATP7B基因致病突变体制备的诊断试剂盒，可以助力Wilson病基因突变的筛查和诊断，可以特异性区分Wilson病患者、携带者和正常人群。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种ATP7B基因致病致病突变体，所述ATP7B基因致病突变体为复合杂合突变，包括c.526_527insA和c.2305_2306insC；

所述c.526_527insA在登录号为NM_000053.4的2号外显子的第526位和527位间存在A插入突变；所述c.2305_2306insC在登录号为NM_000053.4的8号外显子的第2305位和2306位间存在C插入突变。