[发明专利]一种自由流等电聚焦电泳缓冲体系

说明书

本发明提供了一种自由流等电聚焦电泳缓冲体系，包括：一个阳极电解液、一个阳极占位缓冲液、一个分离缓冲液和一个阴极稳定缓冲液、一个阴极电解液，所述阳极电解液为100mM磷酸、200mM吡啶乙醇，所述阴极电解液为100mMNaOH、300mMEACA。电泳时，本体系在电场的作用下在pH8.5‑10.0之间形成稳定的pH梯度，最佳分辨率可以达到0.02pH，用于抗体类药物的电荷异构体的分离制备。

技术领域

本发明涉及自由流电泳技术领域，具体为一种自由流等电聚焦电泳缓冲体系。

背景技术

电荷异构体分析是生物治疗蛋白质的一项监管要求。这些大的异质分子在生产过程中历经多种酶促翻译后修饰，例如糖基化和赖氨酸切断。此外，在纯化和储存过程中可发生多种化学修饰，例如氧化或脱氨。自由流电泳是制备蛋白质药物电荷异构体的最佳方法。

自由流电泳(Free Flow Electrophoresis，FFE)是半制备型分离技术，具有可连续分离、多种分离模式、无固定支持介质和分离条件温和等优势，特别适用于生物材料的分离纯化和制备。自由流等电聚焦电泳(IEF-FFE)利用连续流动的两性电解质溶液，在分离室内的电场方向形成线性pH梯度。样品随溶液纵向流动，并在电场作用下发生横向偏转，达到其等电点处不再横向移动，被强制聚焦在某位置，不受扩散和对流的影响，仅在溶液流动方向移动。具有不同等电点的蛋白质或肽等良性物质可通过IEF-FFE达到分离。

由于电荷异构体是生物治疗蛋白质的一项监管条件，每个组分的异构体的活性、化学修饰以及分子量均不相同，对每个组分进行分析有利于后续药物的改进，对于抗体类药物来说，等电点基本上集中在8.5-10.0之间，因此提高这个pH区间内的灵敏度可以更好的获得单组份的异构体，可以更好的对异构体的活性、分子量以及修饰进行分析。

发明内容

本发明所解决的技术问题在于提供一种自由流等电聚焦电泳缓冲体系，以解决技术背景中所提到的问题。为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种自由流等电聚焦电泳缓冲体系，包括：一个阳极电解液、一个阳极占位缓冲液、一个分离缓冲液和一个阴极稳定缓冲液、一个阴极电解液，所述阳极电解液为100mM磷酸、200mM吡啶乙醇，所述阴极电解液为100mM NaOH、300mM EACA。

优选地，所述阳极占位缓冲液为80mM磷酸、200mM吡啶乙醇，80mM乙二酸。

优选地，所述分离缓冲液为1.5％pharmalyte8-10.5、0.1％pharmalyte 5-8。

优选地，所述阴极稳定缓冲液为150mM KOH、300mM EACA。

优选地，所述缓冲体系的最佳分辨率在0.02pH。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：电泳时，本体系在电场的作用下在pH8.5-10.0之间形成稳定的pH梯度，最佳分辨率可以达到0.02pH，用于抗体类药物的电荷异构体的分离制备。

附图说明

为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为实施例中不同等电点的标准品的420nm光吸收作图；

图2为实施例中不同等电点的标准品均匀分散在不同的分流孔；

图3为实施例中毛细管等电聚焦法分离电荷异构体结果图；

图4为实施例中本体系所得的电荷异构体420nm光吸收作图。

具体实施方式