[发明专利]导向RNA探针及用于检测尘螨变应原的应用和试剂盒

权利要求书

1.导向RNA探针，其特征在于，包括：Der P1 probe或/和Der F1 probe，其中，Der P1probe的编码DNA序列如SEQ ID No.1至SEQ ID No.5中至少一项所示，Der F1 probe的编码DNA序列如SEQ ID No.6至SEQ ID No.10中至少一项所示。

2.根据权利要求1所述导向RNA探针，其特征在于，Der P1 probe的靶基因为屋尘螨1类变应原基因，Der F1 probe的靶基因为粉尘螨1类变应原基因。

3.根据权利要求1所述导向RNA探针，其特征在于，所述导向RNA探针的编码DNA序列包括：用于Cas13a核酸酶识别的核酸序列，以及与靶基因互补的核酸序列。

4.如权利要求1-3任一项所述导向RNA探针在制备检测尘螨变应原产品中的应用。

5.一种用于检测尘螨变应原的CRISPR-Cas13系统，其特征在于，包括：Cas13a核酸酶、如权利要求1-3任一项所述导向RNA探针、报告分子；

如权利要求1-3任一项所述导向RNA探针针对屋尘螨1类变应原基因或/和粉尘螨1类变应原基因，Cas13a核酸酶通过在导向RNA探针识别靶基因后，激活酶活性，并对报告分子进行切割，释放检测信号。

6.根据权利要求5所述用于检测尘螨变应原的CRISPR-Cas13系统，其特征在于，还包括：检测缓冲液，检测缓冲液包括：T7 DNA聚合酶、rNTPs和氯化镁。

7.针对屋尘螨1类变应原基因的引物对，其特征在于，包括如下至少一组：

(1)Der P1-F1和Der P1-R1，其核酸序列依次如SEQ ID No.11和SEQ ID No.12所示；

(2)Der P1-F2和Der P1-R2，其核酸序列依次如SEQ ID No.13和SEQ ID No.14所示；

(3)Der P1-F3和Der P1-R3，其核酸序列依次如SEQ ID No.15和SEQ ID No.16所示；

(4)Der P1-F4和Der P1-R4，其核酸序列依次如SEQ ID No.17和SEQ ID No.18所示；

(5)Der P1-F5和Der P1-R5，其核酸序列依次如SEQ ID No.19和SEQ ID No.20所示。

8.针对粉尘螨1类变应原基因的引物对，其特征在于，包括如下至少一组：

(1)Der F1-F1和Der F1-R1，其核酸序列依次如SEQ ID No.21和SEQ ID No.22所示；

(2)Der F1-F2和Der F1-R2，其核酸序列依次如SEQ ID No.23和SEQ ID No.24所示；

(3)Der F1-F3和Der F1-R3，其核酸序列依次如SEQ ID No.25和SEQ ID No.26所示；

(4)Der F1-F4和Der F1-R4，其核酸序列依次如SEQ ID No.27和SEQ ID No.28所示；

(5)Der F1-F5和Der F1-R5，其核酸序列依次如SEQ ID No.29和SEQ ID No.30所示。

9.一种试剂盒，其特征在于，包括：等温扩增系统，如权利要求4或5所述用于检测尘螨变应原的CRISPR-Cas13系统，以及可视化系统；

其中，等温扩增系统包括：如权利要求7所述针对屋尘螨1类变应原基因的引物对，或/和，如权利要求8所述针对粉尘螨1类变应原基因的引物对。

10.一种如权利要求9所述试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：将样品RNA通过等温扩增系统进行体外反转录和cDNA扩增；随后经用于检测尘螨变应原的CRISPR-Cas13系统对屋尘螨1类变应原基因或/和粉尘螨1类变应原基因特异性识别；通过可视化系统观察检测信号以判断待检样品是否含有屋尘螨1类变应原或/和粉尘螨1类变应原。