[发明专利]一种不表达Peg菌毛的鸡伤寒沙门菌弱毒分离株及其应用

说明书

本发明公开了一种不表达Peg菌毛的鸡伤寒沙门菌弱毒分离株及其应用。本发明的分离株口服接种1×10supgt;10 /supgt;CFU剂量的SGOP株对1日龄SPF鸡无任何致病性，并且SGOP株免疫接种1日龄SPF鸡，21天后免疫鸡群能抵抗鸡伤寒沙门菌野毒株U20的攻毒，70%的攻毒鸡群不发病而得到保护。本发明的SGOP株安全性较高，并且不会影响禽源沙门菌的监测净化程序，具有应用于临床防控鸡伤寒沙门菌感染及其标记性弱毒疫苗候选株较大潜力。

技术领域

本发明涉及动物细菌性疾病疫苗技术领域，具体涉及一种不表达Peg菌毛的鸡伤寒沙门菌弱毒株及其应用，其可以在标记性弱毒疫苗候选株中应用。

背景技术

菌毛是细菌表面一种特殊的细丝状结构，其顶端的黏附素蛋白可以结合宿主的特定组织细胞，是细菌黏附、定植致病的关键蛋白。peg基因操纵子编码的Peg菌毛主要表达在D群沙门菌中。peg基因操纵子主要由pegA、pegB、pegC和pegD 4个结构基因编码蛋白完成Peg菌毛的合成和组装。有研究报道，肠炎沙门菌P125109基因组中pegA基因全长534bp，编码Peg菌毛主要亚单位，分子量约为19ku；pegB位于pegA下游，全长732bp，编码分子量为27ku的伴侣蛋白；pegC全长2394bp编码分子量为89.2ku的推进蛋白；pegD全长1023bp，编码菌毛的顶端粘附素，分子量大小37.3ku，位于Peg菌毛结构的顶端。

沙门菌疫苗的免疫接种被认为是控制沙门菌感染的重要方式。禽源沙门菌传统疫苗分为3类：灭活疫苗、亚单位疫苗以及减毒活疫苗。理想的禽源沙门菌疫苗应该具备方便大规模接种，能强烈诱导体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫应答，持续性长时间免疫应答，较高安全性和不影响净化程序等特点。

沙门菌灭活疫苗大多采用肌内注射或皮下注射方式进行免疫接种。这些灭活疫苗能引起抗体免疫应答。然而，灭活疫苗不能诱导CD8⁺ T细胞免疫和黏膜免疫应答，并且灭活疫苗抗体免疫应答持续时间短，在宿主体内较易清除，因此灭活疫苗常需要多次加强免疫接种。此外，灭活疫苗还需要配合佐剂以获得最佳免疫效果。

沙门菌亚单位疫苗大多通过肌内注射或皮下注射途径进行免疫接种，其本身不能诱导机体产生CD8⁺ T细胞免疫和黏膜免疫应答。同灭活疫苗一样，亚单位疫苗也需要与合适的佐剂配合使用。考虑到沙门菌亚单位疫苗制备过程繁琐，成本昂贵，因此不适用于养禽场大规模免疫接种。

沙门菌减毒活疫苗能通过口服途径进行免疫接种，其能诱导较为强烈的体液免疫、CD8⁺ T细胞免疫和黏膜免疫应答，并且沙门菌减毒活疫苗株会在宿主肠道有限定植和增殖，能够引起较长时间的持续性免疫应答，不需要多次加强免疫接种。然而，减毒活疫苗株存在毒力返强的风险，需要持续的监测以确保不存在毒力返强的风险。而且，如果减毒活疫苗株不含有与田间野毒株相区分的基因标记(即无法区分疫苗株免疫鸡群和野毒株感染鸡群)，则会干扰到禽源沙门菌的净化程序。

鉴于3000种以上沙门菌血清型和多种不同的分离株和变异株，且每年不断增加，值得注意的是，人们在致弱多种沙门菌病原菌研究的同时，在自然界分离鉴定出不同的自然弱毒沙门菌，包括早在1970年分离报道的弱毒分离株Salmonella Sofia，已在澳大利亚、德国和以色列等国家研究报道。此外，国内也有鸡伤寒沙门菌自然弱毒分离株(SG01株)的相关报道。考虑到实际应用过程中人工减毒细菌活疫苗的安全性保障，将自然弱毒分离株作为沙门菌活疫苗候选菌株进行研发是较理想和安全的创新选择。

然而，已被报道的鸡伤寒沙门菌弱毒分离株SG01本身无生物标记，这会导致鸡群免疫接种SG01株后诱导宿主产生的血清抗体与鸡群感染鸡伤寒沙门菌野毒株后产生的血清抗体无法区分，干扰影响鸡群感染沙门菌的诊断，最终不可避免地影响禽源沙门菌的监测净化程序和效果。因此，SG01株作为活疫苗，若应用于养禽场鸡群免疫接种则具备上述存在的缺陷，需要进一步发掘免疫接种后能区分疫苗株免疫鸡群和野毒株感染鸡群的鸡伤寒沙门菌候选疫苗菌株。

发明内容