[发明专利]一种量子点荧光微球标记的双通量免疫层析检测卡及其应用

权利要求书

1.一种量子点荧光微球标记的双通量免疫层析试纸条，所述试纸条包括PVC背板及设置在PVC背板上的依次排列的样品垫、结合垫、反应垫和吸收垫，邻垫之间部分重叠，其特征在于，所述反应垫上从靠近所述结合垫端到靠近所述吸收垫端依次设置相互平行的检测线T₂线、检测线T₁线和质控线C线，检测线T₁线和检测线T₂线分别包被重组GP5蛋白和重组N蛋白，质控线C线包被有羊抗鼠IgG抗体；所述结合垫含有鼠抗猪IgG抗体-生物素-亲和素复合物-量子点荧光微球；其中，

所述重组GP5蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述重组N蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述量子点荧光微球为粒径在30~50nm范围内，荧光效率大于70%的量子点荧光微球；

所述重组GP5蛋白在检测线T₁线上的包被量为0.8~1.5 μg/cm²；所述重组N蛋白在检测线T₂线上的包被量为0.8~1.5 μg/cm²；

所述羊抗鼠IgG抗体在质控线C线上的包被量为0.5~1.0 μg/cm²；

所述鼠抗猪IgG抗体-生物素-亲和素复合物-量子点荧光微球在结合垫上的含量为2.0~6.0 μg/cm²。

2.根据权利要求1所述的双通量免疫层析试纸条，其特征在于，所述检测线T₁线和检测线T₂线之间的距离为3~4 mm，检测线T₁线、质控线C线之间的距离为3~4 mm。

3.权利要求1-2任一所述的双通量免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

结合垫的制备：将鼠抗猪IgG抗体-生物素-亲和素复合物-量子点荧光微球均匀喷涂在浸泡后的玻璃纤维上，干燥，得到结合垫；

反应垫的制备：将重组GP5蛋白和重组N蛋白分别包被于硝酸纤维素膜作为检测线T₁线和检测线T₂线，将羊抗鼠IgG抗体包被于硝酸纤维素膜作为质控线C线，封闭，干燥，得到反应垫；

组装：依次将反应垫、吸收垫、结合垫和样本垫粘附在PVC背板上，邻垫之间部分重叠，切割，即得。

4.一种量子点荧光微球标记的双通量免疫层析检测卡，其特征在于，所述双通量免疫层析检测卡包括权利要求1-2任一所述的双通量免疫层析试纸条和装载权利要求1-2任一所述的双通量免疫层析试纸条的检测卡壳。

5.权利要求1-2任一所述的双通量免疫层析试纸条或权利要求4所述的双通量免疫层析检测卡在如下任一中的应用：

A、制备检测待测样本中猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5抗体和N抗体的浓度的产品中的应用；

B、制备检测待测样本中猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5抗体的浓度的产品中的应用；

C、制备检测待测样本中猪繁殖与呼吸综合征病毒N抗体的浓度的产品中的应用；

D、制备检测待测样本中是否含有猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5抗体和N抗体的产品中的应用；

E、制备检测待测样本中是否含有猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5抗体的产品中的应用；

F、制备检测待测样本中是否含有猪繁殖与呼吸综合征病毒N抗体的产品中的应用；

G、制备检测待测样本中是否含有猪繁殖与呼吸综合征病毒的产品中的应用。

6.一种非诊断目的检测待测样本中猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5抗体和/或N抗体的浓度的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）建立Logistic拟合曲线方程：

将已知浓度的猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和N抗体混合后稀释得样本稀释液，利用权利要求4所述的双通量免疫层析检测卡或权利要求1-2任一所述的双通量免疫层析试纸条分别对样品稀释液进行检测，采用干式荧光分析仪器采集检测线T₁线、检测线T₂线和质控线C线的荧光强度值，计算T₁/C值和T₂/C值；

以浓度为横坐标、T₁/C值为纵坐标通过ELISAcalc进行Logistic曲线拟合分析，计算得到检测GP5抗体的Logistic曲线拟合方程，

以浓度为横坐标、T₂/C值为纵坐标通过ELISAcalc进行Logistic曲线拟合分析，计算得到检测N抗体的Logistic曲线拟合方程；

2）待测样本中猪繁殖与呼吸综合征病毒N抗体和/或GP5抗体的浓度的检测：

利用权利要求4所述的双通量免疫层析检测卡或权利要求1-2任一所述的双通量免疫层析试纸条对待测样本进行检测，采用干式荧光分析仪器采集检测线T₁线、检测线T₂线和质控线C线的荧光强度值，计算T₁/C值和T₂/C值，T₁/C值代入检测GP5抗体的Logistic曲线拟合方程得出待测样品中猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5抗体的浓度；T₂/C值代入检测N抗体的Logistic曲线拟合方程得出待测样品中猪繁殖与呼吸综合征病毒N抗体的浓度；

其中，T₁代表检测线T₁线的荧光强度值，T₂代表检测线T₂线的荧光强度值，C代表质控线C线的荧光强度值。