[发明专利]亲和配体及其相关方法

说明书

本申请涉及亲和配体及其相关方法。公开了可用于温和洗脱亲和色谱的亲和配体，包括对免疫球蛋白M、A和E有特异性的亲和配体，以及鉴定和使用这类亲和配体的方法。

本申请是中国专利申请号201680030798.1的分案申请。

发明领域

本发明涉及亲和配体，如抗体亲和配体，以及使用、鉴定和制备亲和配体的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求2015年5月28日提交的美国临时专利申请号62/167,387的优先权，该申请通过引用全文纳入本文。

关于通过EFS-WEB以文本文件形式提交的序列表

序列表的正式文本通过EFS-Web以ASCII格式的序列表电子化提交，文件名1010896_ST25.txt，2016年5月26日生成，大小103,855字节，与说明书同时提交。该ASCII格式文档中所含的序列表是本说明书一部分且通过引用全文纳入本文。

背景技术

亲和色谱是基于亲和配体与其靶标之间，如抗体和抗原之间的高特异性相互作用分离生物化学混合物的方法。与所需靶标选择性相互作用的亲和配体被固定在固体支持物上以产生可以柱形式使用的亲和基质。亲和色谱可用于多种应用，包括从细胞游离提取物或细胞培养上清的蛋白质纯化、核酸纯化、和从血液纯化。

发明内容

本发明提供了生成亲和配体的方法，这类亲和配体的用途，和特异性亲和配体。

在一方面，提供了特异性结合靶分子的亲和配体，其中该亲和配体与靶分子的特异性结合强度在包括(i)约4.0至约5.5的pH或(ii)约1-2M MgCl₂的缓冲液条件下降低。

在一些情况中，缓冲液条件可具有约4.0至约5.0的pH。在一些情况中，缓冲液条件可具有约4.0的pH。在一些情况中，缓冲液条件可具有约5.0的pH。在一些情况中，缓冲液条件可包括2M MgCl₂。在一些情况中，缓冲液条件可包括2M MgCl₂和相对中性的pH。

在一些情况中，靶分子可以是免疫球蛋白。在一些情况中，靶分子可以是选自下组的免疫球蛋白：免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、或免疫球蛋白E(IgE)。

在一些情况中，亲和配体可以是免疫球蛋白。例如，在一些情况中，亲和配体可以是重组Fab片段或Fab片段衍生物。在一些情况中，亲和配体可以是包含选自图1A所示的任何序列的重链互补决定区CDR1、CDR2和CDR3序列的抗IgE抗体。在一些情况中，亲和配体可以是具有选自图1B所示的任何序列的轻链互补决定区CDR1、CDR2和CDR3序列的抗IgE抗体。在一些情况中，亲和配体可以是包含选自图2A所示的任何序列的重链互补决定区CDR1、CDR2和CDR3序列的抗IgA抗体。在一些情况中，亲和配体可以是包含选自图2B所示的任何序列的轻链互补决定区CDR1、CDR2和CDR3序列的抗IgA抗体。在一些情况中，亲和配体可以是包含选自图3A所示的任何序列的重链互补决定区CDR1、CDR2和CDR3序列的抗IgM抗体。在一些情况中，亲和配体可以是包含选自图3B所示的任何序列的轻链互补决定区CDR1、CDR2和CDR3序列的抗IgM抗体。

在一些情况中，亲和配体可连接至固体支持物。在一些情况中，固体支持物可以是珠或样品板。在一些情况中，珠可以是琼脂糖珠，聚苯乙烯珠、聚甲基丙烯酸酯珠，聚丙烯酰胺珠，磁珠，或顺磁珠。

在另一个方面中，提供了分离靶分子的方法，该方法包括以下步骤：提供连接至亲和配体的固体支持物；使固体支持物与含靶分子的样品接触；用洗涤缓冲液洗涤固体支持物以去除样品的未结合组分；并用包含(i)约4.0至约5.5的pH或(ii)约1-2M MgCl₂的洗脱缓冲液从固体支持物上洗脱结合的靶分子。