[发明专利]一种检测非洲猪瘟病毒抗体的ELISA检测试剂盒以及protein L的应用

说明书

本发明涉及免疫检测技术领域，公开了一种检测非洲猪瘟病毒抗体的ELISA检测试剂盒以及proteinL的应用。本发明应用proteinL和非洲猪瘟病毒衣壳蛋白P72三聚体联合制备检测非洲猪瘟病毒抗体的ELISA检测试剂盒，所述试剂盒能够快速而特异地检测血清中非洲猪瘟病毒抗体，且反应灵敏性极高，其操作简便、成本低廉、反应结果稳定，适于在大规模养殖中对猪群进行非洲猪瘟的监测、排查工作，易于大范围推广应用。

本申请是申请日为2022年01月24日、申请号为202210078482.7、发明名称为《一种检测非洲猪瘟病毒抗体的ELISA检测试剂盒以及protein L的应用》的分案申请。

技术领域

本申请涉及免疫检测技术领域，尤其涉及一种检测非洲猪瘟病毒抗体的ELISA检测试剂盒以及proteinL的应用。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swinefevervirus，ASFV)感染引起猪的一种急性、烈性传染病。该病在临床上可引起猪的高热、网状内皮系统出血、可视黏膜发红等症状，强毒株感染猪病程短，死亡率高达100％。

非洲猪瘟病毒是一种有囊膜的双链DNA病毒，具有复杂的多层结构。其5层结构由内到外依次为类核、核壳、内膜、衣壳和外囊膜。非洲猪瘟病毒可编码200多种蛋白质，其中衣壳的主要成分P72蛋白约占非洲猪瘟病毒总质量的33％。此前，已有报道基于P30、P54蛋白开发的间接ELISA抗体检测试剂盒。其中，由于P72全长三聚体蛋白制备困难，市售基于P72蛋白的间接ELISA试剂盒均应用P72截短体，尚无应用P72全长三聚体蛋白制备检测试剂盒的报道。此前，我们已成功在酿酒酵母表达系统中大量表达P72三聚体蛋白，且其结构与天然结构完全相同(专利号：202110522777.4)。

OIE推荐的非洲猪瘟病毒诊断技术包括病原学检测和血清学试验。其中，ELISA是OIE规定的国际贸易检验方法。基于P72全长三聚体蛋白的间接ELISA方法具有特异性高、敏感性强的优势，同时ELISA多样品、高通量检测的特点也适于在大规模养殖场中推行。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种检测非洲猪瘟病毒抗体的ELISA试剂盒，用于非洲猪瘟病毒抗体检测时具备较高的特异性、灵敏性和准确性；

本发明的另外一个目的在于提供protein L在制备检测非洲猪瘟病毒抗体的ELISA试剂盒中的应用，如制备酶结合物。

为了解决上述技术问题/达到上述目的或者至少部分地解决上述技术问题/达到上述目的，本发明提供了一种检测非洲猪瘟病毒抗体的ELISA检测试剂盒，包括包被有非洲猪瘟病毒衣壳蛋白P72三聚体的酶标板和protein L酶结合物。

本发明在前期P72全长三聚体蛋白已有成果基础上进行非洲猪瘟病毒抗体ELISA检测产品的研制，经过本发明研究发现，以非洲猪瘟病毒衣壳蛋白P72三聚体作为包被抗原并结合protein L酶结合物，按照间接ELISA检测，灵敏度可以检测到64000倍稀释阳性血清，而常规的以P72无序折叠单体蛋白、P54蛋白和P30蛋白为包被抗原的灵敏度仅可以检测到16000倍、8000倍和8000倍稀释阳性血清；

而且，在相同的P72三聚体包被抗原前提下，使用protein L/A/G酶结合物和羊抗猪IgG酶结合物进行检测，结果显示使用protein L酶结合物可以检测到64000倍稀释阳性血清，其他三种酶结合物均只能检测到32000倍稀释阳性血清。鉴于上述的优异技术效果，本发明提出了protein L在制备检测非洲猪瘟病毒抗体的ELISA检测试剂盒中的应用，优选为protein L和非洲猪瘟病毒衣壳蛋白P72三聚体联合在制备检测非洲猪瘟病毒抗体的ELISA检测试剂盒中的应用。在本发明具体实施方式中，所述protein L用于制备试剂盒中的酶结合物。