[发明专利]抗原蛋白及其应用

说明书

本发明属于病菌检测技术领域，具体涉及一种抗原蛋白及其应用，该抗原蛋白适用于鸡白痢沙门氏菌检测。该抗原蛋白包括如SEQIDNO.1或SEQIDNO.2所示序列，其对鸡白痢沙门氏菌抗体均有很强的特异性，以两种抗原蛋白为包被抗原的间接ELISA方法检测鸡白痢沙门氏菌，最低阳性血清稀释比均能达到1：1600，灵敏度高；而且批内重复变异系数与批间重复变异系数均低于10％，重复性好。

技术领域

本发明属于病菌检测技术领域，具体涉及一种抗原蛋白及其应用，该抗原蛋白适用于鸡白痢沙门氏菌检测。

背景技术

鸡白痢沙门菌是引起鸡白痢的病原菌，具有高度宿主专一性，既可水平传播，又有严重的垂直传播，是危害养鸡业最严重的疾病之一。鸡白痢沙门氏菌多侵害20日龄以内幼雏，引起白色下痢，病死率极高，造成的危害和经济损失巨大。目前西方国家已完全消灭了鸡白痢，但我国仍然爆发严重。

常规的鸡白痢检测方法为平板凝集，通过针刺鸡采血，在平板上与鸡白痢、鸡伤寒多价染色平板凝集试验抗原混合,通过出现凝集现象来判断是否感染鸡白痢沙门氏菌。该方法敏感性低，易导致漏检；而一般阴性血清在足够时间下也会产生凝集，易造成假阳性。传统的玻板凝集试验不能满足鸡白痢沙门氏菌抗体的高效、全面检出，因此，发展一种新型的鸡白痢沙门氏菌抗体检测方法显得十分必要。

发明内容

针对以上问题，本发明目的之一在于提供一种抗原蛋白，其可以作为包被抗原使用ELISA检测方法检测鸡白痢沙门氏菌抗体，从而检测鸡白痢沙门氏菌，该抗原蛋白对鸡白痢沙门氏菌抗体特异性强，且检测结果准确。

为了达到上述目的，可以采用以下技术方案：

本发明目的一方面提供一种抗原蛋白，其编码基因包括如SEQIDNO.1或SEQIDNO.2所示序列。

具体地，该抗原蛋白是以IPAJ、BFR基因序列为模板，通过PCR扩增其基因，然后使用限制性内切酶NdeI和Xba I进行内切后与pCZN1载体连接得到，可以特异性识别鸡白痢沙门氏菌抗体，且特异性强；其中，编码基因包括如SEQIDNO.1所示序列的抗原蛋白是以IPAJ基因序列为模板然后按照上述方法得到的，编码基因包括如SEQIDNO.2所示序列的抗原蛋白是以BFR基因序列为模板然后按照上述方法得到的。

本发明目的另一方面提供一种检测试剂，其至少包括编码基因如SEQIDNO.1和/或SEQIDNO.2所示序列的抗原蛋白。

具体地，在基于氨基酸序列包括如SEQIDNO.1或SEQIDNO.2所示序列的抗原蛋白上，可以与本领域所已知的ELISA检测常规的试剂结合用于检测鸡白痢沙门氏菌，本领域所已知的ELISA检测常规的试剂包括但不限于一抗、酶标二抗或封闭液等。需要说明的是，上述检测试剂中，氨基酸序列包括如SEQIDNO.1所示序列的抗原蛋白和氨基酸序列包括如SEQIDNO.2所示序列的抗原蛋白可以分别单独与其他试剂共同作用检测鸡白痢沙门氏菌，也可以组合后与其他试剂共同作用检测鸡白痢沙门氏菌。该检测试剂对鸡白痢沙门氏菌抗体特异性强，可以有效检测鸡白痢沙门氏菌。

本发明目的再一方面提供一种检测试剂盒，其可以包括上述的检测试剂。

具体地，上述检测试剂盒除了包括上述的检测试剂外，还可以包括本领域所已知的试剂盒的其他组成，比如检测孔板，比如试剂盒说明书，比如会有盛装各种检测试剂的试剂瓶，比如会设置成若干小格子用来放置检测试剂瓶，比如会有滴管用来移取检测试剂等。

本发明目的再一方面提供一种上述的抗原蛋白或上述的检测试剂在检测鸡白痢沙门氏菌中的应用。具体地，由于上述抗原蛋白或上述的检测试剂对鸡白痢沙门氏菌具有很强的特异性，将其用于鸡白痢沙门氏菌的检测，可以提高检测准确率。

本发明目的再一方面提供一种检测鸡白痢沙门氏菌的ELISA方法，至少包括：使用氨基酸序列包括如SEQIDNO.1或SEQIDNO.2所示序列的抗原蛋白作为包被抗原。