[发明专利]一种检测2型鸭圆环病毒ORF3有无缺失的ELISA检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供一种检测2型鸭圆环病毒ORF3有无缺失的ELISA检测试剂盒及其应用，所述试剂盒包括包被有2型鸭圆环病毒Cap重组蛋白的酶标板A以及包被有2型鸭圆环病毒ORF3重组蛋白的酶标板B。本发明以2型鸭圆环病毒的Cap蛋白和ORF3蛋白作为包被抗原，建立2型鸭圆环病毒间接ELISA检测方法，经组合后可用于研究2型鸭圆环病毒ORF3有无缺失，本发明的检测方法还具有检测快速、便捷的优点。本发明的建立可填补国内外相关领域空白。

技术领域

本发明属于水禽传染病学领域，具体涉及一种检测2型鸭圆环病毒ORF3有无缺失的ELISA检测试剂盒及其应用。

背景技术

根据国际病毒分类委员会(The International Committee on Taxonomy ofViruses，ICTV)最新分类，圆环病毒科(Circoviridae)包括两个属(Genus)：圆环病毒属(Circovirus)和圆圈病毒属(Cyclovirus)。目前，圆环病毒属包括鹦鹉喙羽病毒(Beak andfeather disease virus，BFDV)、鸭圆环病毒(Duck circovirus，DuCV)、鹅圆环病毒(Goosecircovirus，GoCV)、鸽圆环病毒(Pigeon circovirus，PiCV)、和猪圆环病毒1型、2型、3型和4型(PCV1、PCV2、PCV3、PCV4)等49个种(Species)成员(https://talk.ictvonline.org/taxonomy/)。

鸭圆环病毒(DuCV)最早由Hattermann等2003年首次在德国番鸭中发现。DuCV为无囊膜、二十面体对称的病毒，其基因组为单股负链环状DNA。其基因组编码两个大的蛋白(ORF-V1和ORF-C1)。ORF-V1位于正链，编码DuCV复制相关蛋白(Rep)，由292个氨基酸(aa)构成。ORF-C1分布在负链上，编码DuCV核衣壳蛋白(Cap)，由257aa组成。在编码区外还存在2个与病毒复制、增殖相关的基因间区：一个基因间区位于ORF-V1和ORF-C1的5′-端之间的区域，由2个反向重复序列构成了一个发夹结构，茎环上有保守的九碱基(TATTATTAC)序列，在茎环区域附近还存在两个正向重复的六碱基序列(GTACTC)。另一个位于ORF-V1和ORF-C1的3′-端基因间区的高变异区域，包含4个正向重复序列(CACTTGGGCAG或CACTTGGCAG)。

酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)是将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。常用的ELISA方法包括间接法、夹心法和竞争法等；其中间接ELISA方法最常用，主要用于血清抗体的检测。在DuCV-2基因组中除ORF-V1和ORF-C1两个主要ORF之外，新鉴定的位于ORF-V1互补链上的第三个功能性ORF，命名为ORF3，但ORF3基因缺失突变株的病毒生物学等尚未见研究。为建立一种可用于研究DuCV-2的ORF3蛋白生物学功能的方法，本研究将DuCV-2的Cap蛋白和ORF3蛋白进行表达，将DuCV-2的Cap蛋白和ORF3蛋白结合建立血清学检测方法，用于区分2型鸭圆环病毒ORF3有无缺失。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测2型鸭圆环病毒ORF3有无缺失的ELISA检测试剂盒及其应用以及建立一种2型鸭圆环病毒ORF3有无缺失的ELISA检测方法。利用所述ELISA检测试剂盒可以对2型鸭圆环病毒ORF3有无缺失进行区分。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种检测2型鸭圆环病毒ORF3有无缺失的ELISA检测试剂盒，它包括包被有2型鸭圆环病毒Cap重组蛋白的酶标板A以及包被有2型鸭圆环病毒ORF3重组蛋白的酶标板B。