[发明专利]一种维血宁合剂的HPLC检测方法

说明书

本发明公开了一种维血宁合剂及其中间品的HPLC检测方法，它包括如下步骤：1)对照品溶液制备；2)供试品溶液制备；3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪。本发明首次采用HPLC建立维血宁合剂中表儿茶素、木犀草素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、儿茶素和白藜芦醇8种成分的含量测定方法，并且采用外标法和一测多评法对比维血宁合剂的含量差异，验证实验方法的可行性。同时，通过建立3批维血宁合剂提取液、清膏、成品的指纹图谱，并识别出27个共有峰，建立从“中间体‑成品”的质量管理体系，完善了维血宁合剂的质量控制方法。

技术领域

本发明涉及一种维血宁合剂的HPLC检测方法。

背景技术

维血宁合剂收载于2020版《中国药典》一部，由虎杖、炒白芍、仙鹤草、地黄、鸡血藤、熟地黄、墨旱莲和太子参8味药材组成，具有滋养阴液、益气生血、清热解毒的功效，临床常用于外感风热所致的出血，血小板减少症，化疗后白细胞减少，小儿贫血等。

目前，对维血宁合剂的质量控制还停留在对方中单个成分进行定量研究，主要集中在大黄素、虎杖苷、芍药苷麦角甾苷和白藜芦醇等成分的定量。不能全面反映维血宁合剂整体质量。多组份整体质量控制已成为中药复方制剂质量控制发展的必由之路。

曹瑞等，维血宁的HPLC指纹图谱研究[J]，其只能测定维血宁中的虎杖苷,大黄素-8-O-β-D葡萄糖苷,大黄素甲醚-8-O-β-D葡萄糖,大黄素和大黄素甲醚共5种成分，仍然不实现中药复方制剂维血宁合剂的高效的质量控制。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种维血宁合剂及其中间品的HPLC检测方法，它包括如下步骤：

1)对照品溶液制备：取儿茶素、表儿茶素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、白藜芦醇和/或木犀草素对照品，加甲醇溶液溶解稀释成溶液，即得对照品溶液；

2)供试品溶液制备：取待检样品，加甲醇溶液溶解，过滤，取滤液作为供试品溶液；

3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪；色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以甲醇为流动相A，以0.2％磷酸水为流动相B；梯度洗脱程序0～5min，75％B；5～15min，75％B→65％B；15～25min，65％B→55％B；25～35min，55％B→40％B；35～45min，40％B→30％B；45～55min，30％B→20％B；55～60min，20％B→65％B；60～62min，65％B→75％B。

进一步地，步骤1)所述对照品与甲醇溶液的质量体积比为0.5～250μg：1ml。

进一步地，步骤2)所述待检样品和甲醇的体积比为1～5ml：1～50ml。

更进一步地，所述待检样品为维血宁合剂或其中间品。

更进一步地，所述中间品为维血宁合剂的原料药提取液或原料药提取液浓缩的清膏。

进一步地，步骤3)所述色谱条件中色谱柱：Acclaim120 C18，250mm×4.6mm,5μm，柱温30℃，进样量10～50μL，流速为1ml/min，检测波长：210nm。

进一步地，所述维血宁合剂及其中间品的指纹图谱中有应有27个共有特征峰，所述共有特征峰包含与儿茶素、表儿茶素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、白藜芦醇和木犀草素相应的色谱峰。

本发明还提供了一种维血宁合剂及其中间品指标成分的含量测定方法，它包括如下步骤：

1)取维血宁合剂及其中间品，以及儿茶素、表儿茶素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、白藜芦醇和/或木犀草素对照品，按前述方法检测；