[发明专利]一种纳米尺度的多功能siRNA递送载体及其制备方法

说明书

本发明公开了一种纳米尺度的多功能siRNA递送载体及其制备方法，属于siRNA递送载体技术领域。多功能siRNA递送载体的制备方法包括以下步骤：将siRNA溶解于PBS缓冲液中，得到siRNA溶液；然后将复合多孔碳改性的纳米二氧化硅送入到海藻酸钠溶液，随后再加入磷酸缓冲溶液，搅拌混合充分，得到纳米添加剂，将纳米添加剂、siRNA溶液按照重量比1:5混合，然后再加入纳米添加剂总量1‑5％的琼脂糖珠，继续搅拌混合均匀；再经过超声分散处理后，得到多功能siRNA递送载体。本发明制备的多功能siRNA递送载体的载体活性度高，具有优异的递送效率。

技术领域

本发明属于siRNA递送载体技术领域，具体涉及一种纳米尺度的多功能siRNA递送载体及其制备方法。

背景技术

外泌体(exosome)是由大多数生物细胞分泌的一种生物纳米粒子，直径约30至100nm，具有典型的脂质双分子层膜结构。外泌体具有类似于病毒的转染机制，在体内具有较高的转染效率，且它不仅具有细胞间信息传递的作用还能被开发运用于各类物质(包括siRNA)的细胞间传输。与传统的药物载体相比，外泌体作为一种新型的，天然药物载体，显示诸如生物相容性好、生物可降解、免疫原性小等优点。然而现有技术中人工合成的siRNA递送载体的递送效率差，载体活性度不高，递送动力不足，基于此，研究开发一种载体活性度高、具有优异的递送效率的多功能siRNA递送载体成为当前亟待研究的重要课题。

纳米是一个尺度，纳米材料是指在三维空间中，至少有一维处于纳米尺寸的范围，也即1～100纳米的范围。纳米材料具有小尺寸效应、表面效应和宏观量子随药效应，因而展现出许多特有的性质，在催化、滤光、光吸收、医药、磁介质及新材料等有广泛的应用前景；纳米二氧化硅由于是超细纳米级，尺寸范围在1～100nm，因此具有许多独特的性质，如具有对抗紫外线的光学性能，能提高其他材料抗老化、强度和耐化学性能等，用途非常广泛。纳米级二氧化硅为无定形白色粉末，无毒、无味、无污染，微结构为球形，呈絮状和网状的准颗粒结构，分子式为SiO₂。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种纳米尺度的多功能siRNA递送载体及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。本发明的创新点在于：纳米添加剂采用复合多孔碳改性的纳米二氧化硅经过海藻酸钠溶液分散，再经过活化处理，得到的纳米添加剂具有高效的活性性能，能够满足递送载体的效果；复合多孔碳改性的纳米二氧化硅通过将纳米二氧化硅先经过柠檬酸钠溶液、草酸处理，得到改性的纳米二氧化硅，然后将多孔碳在水中分散，得到高比表面积的原料，通过与改性的纳米二氧化硅溶液经过复合改进，改性的产品具有高效的承载表面积，同时与其他原料复配混合后，制备的多功能siRNA递送载体的载体活性度高，具有优异的递送效率。

本发明提供如下技术方案：

本发明提供一种纳米尺度的多功能siRNA递送载体的制备方法，包括以下步骤：

步骤一：将siRNA溶解于2-3倍(重量)的PBS缓冲液中，得到siRNA溶液；

步骤二：将复合多孔碳改性的纳米二氧化硅送入到3-6倍(重量)的海藻酸钠溶液中搅拌处理，随后再加入海藻酸钠溶液总量10-15％的磷酸缓冲溶液，搅拌混合充分，得到纳米添加剂；

步骤三：随后将纳米添加剂、siRNA溶液按照重量比1:5～1:1混合，然后再加入纳米添加剂总量1-5％的琼脂糖珠，且粒径为5-10目，琼脂糖珠为Invitrogen高纯度的琼脂糖珠，继续搅拌混合10-60min；

步骤四：再经过超声分散处理，超声结束，最后于35-37℃下静置1-2h，得到多功能siRNA递送载体。

优选地，步骤二中所述磷酸缓冲溶液的pH为5.5-6.0。

优选地，步骤二中所述海藻酸钠溶液的质量分数为10-20％。