[发明专利]用于检测MON87712转基因大豆品系的引物、探针、试剂盒及方法

权利要求书

1.用于检测MON87712转基因大豆品系的引物，其特征在于，所述引物的核苷酸序列为：

MON87712-F：5’-ATGTGAGTACATTCTCGAGCAG-3’，

MON87712-R：5’-TGAAGGCGGGAAACGACAATC-3’。

2.用于检测MON87712转基因大豆品系的探针，其特征在于，所述探针的核苷酸序列为：

MON87712-P：5-ACCTGCAGAAGCTAGCTTGATGGGGA-3’。

3.根据权利要求2所述的探针，其特征在于，所述探针的5’端标记有荧光基团，所述探针的3’端标记有淬灭基团。

4.一种用于检测MON87712转基因大豆品系的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物和权利要求2-3中任一项所述的探针。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括检测内参基因Lectin的引物和探针。

6.一种用于检测MON87712转基因大豆品系的方法，其特征在于，采用权利要求4或5所述的试剂盒中的引物和探针进行检测，所述检测方法选自荧光定量PCR检测、微滴式数字PCR检测、基因芯片检测或等温核酸扩增检测。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，当所述检测方法为微滴式数字PCR检测时，包括以下步骤：

(1)提取样品DNA；

(2)以所述样品DNA为模板，加入引物和探针、ddPCR Super Mix和蒸馏水，得到反应体系；

(3)将步骤(2)配制的反应体系和微滴生成油加入微滴生成卡中，置于微滴发生器中生成微滴；

(4)进行扩增反应，反应结束后进行微滴荧光数据分析。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述提取样品DNA的方法为改良CTAB-磁珠法，所述改良CTAB-磁珠法包括以下步骤：

(1)在样品中加入CTAB裂解液进行处理，取上清液备用；

(2)在五联管中从左往右依次加入以下试剂：第一管中加入上清液、磁珠吸附缓冲液和磁珠悬浮液；第二管中加入上清液、磁珠吸附缓冲液；第三管和第四管中分别加入酒精；第五管中加入ddH₂O；

(3)对第一管中液体震荡混匀，取磁珠；转移磁珠至第二管中，震荡混匀，取磁珠；转移磁珠至第三管中，震荡混匀，取磁珠；转移磁珠至第四管中，震荡混匀，取磁珠并干燥；转移磁珠至第五管中，震荡混匀，第五管剩余溶液即为样品DNA溶液。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(2)的反应体系包括以下组分：2×ddPCR Super Mix 10μL、每种上游引物1μL、每种下游引物1μL、每种探针1μL、样品DNA 2μL、采用灭菌蒸馏水补足至20μL。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(4)中扩增反应的反应程序为：95℃预变性10min；95℃变性15s，60℃退火延伸1min，40个扩增；98℃保持10min使酶失活。