[发明专利]一种制作裸鼠移植瘤模型的方法

说明书

本发明涉及动物模型制作技术领域，特别是涉及一种制作裸鼠移植瘤模型的方法，包括如下步骤：选择4～6周龄的裸鼠，在无菌条件下向其接种肿瘤细胞，其中肿瘤细胞的接种量为(0.1～2)x10⁷/200ul/只；种瘤后采用免疫抑制剂加速瘤体生长，其中免疫抑制剂的添加量为(1～2)mg/天/只；继续培养至少5天，即得裸鼠移植瘤模型。本发明解决现有技术中裸鼠移植瘤模型的成瘤成功率较低的问题。本发明的裸鼠移植瘤模型通过多个过程控制，既能拓宽接种种瘤的类型范围，也能提高接种瘤体的成功率。

技术领域

本发明涉及动物模型制作技术领域，特别是涉及一种制作裸鼠移植瘤模型的方法。

背景技术

裸鼠由于其特殊的体质，可作为研究不同药物介导的裸鼠移植瘤模型，在科学研究中起着重要的作用。裸鼠一般包括裸小鼠和裸大鼠。裸小鼠的抵抗力差，易在SPF环境下可生存，所用的笼具、垫料、饲料、饮水患病毒性肝炎和肺炎，因而饲养和繁殖要求条件比较严格，等都要求经过严密灭菌消毒并采用隔离器饲养，以保证长期存活并进行繁殖。裸大鼠的一般特征似裸小鼠，但躯干部仍有稀少被毛并非象裸小鼠那样完全无毛，头部及四肢毛更多；裸大鼠易患呼吸道疾病。

在现有技术中，裸鼠移植瘤模型在制作过程中容易出现种瘤不成功、裸鼠不耐受等问题，导致成瘤成功率较低。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种制作裸鼠移植瘤模型的方法，用于解决现有技术中裸鼠移植瘤模型的成瘤成功率较低的问题。本发明的裸鼠移植瘤模型通过多个过程控制，既能拓宽接种种瘤的类型范围，也能提高接种瘤体的成功率。

为实现上述目的及其他相关目的，

本发明提供一种制作裸鼠移植瘤模型的方法，包括如下步骤：

步骤一、选择4～6周龄的裸鼠，在无菌条件下向其接种肿瘤细胞，其中肿瘤细胞的接种量为(0.1～2)x10⁷/200ul/只；

步骤二、种瘤后采用免疫抑制剂加速瘤体生长，其中免疫抑制剂的添加量为(1～2)mg/ 天/只；

步骤三、继续培养至少5天，即得裸鼠移植瘤模型。

上述裸鼠移植瘤模型在制作过程中，首先选用4～6周龄的裸鼠，在此年龄段的裸鼠具有一定的免疫力，避免接种后出现裸鼠不耐受导致其过早死亡的问题。且，在此年龄段的裸鼠的免疫力并不够强，不会影响肿瘤细胞的成瘤过程，更利于成功种瘤。此外，在此年龄段的裸鼠也能适应种瘤实验周期，保证在实验周期内肿瘤的瘤体积不大于2000mm³。

裸鼠移植瘤模型在制作过程中控制肿瘤细胞的接种量，避免出现肿瘤生长速度过快或过慢的情况，更利于观察研究裸鼠的种瘤情况。此外，在种瘤后添加免疫抑制剂，可以避免裸鼠排异，加速瘤体在裸鼠体内的生长。

一般而言，由于裸鼠没有胸腺，免疫力差，因此应尽可能的保证实验全程处于无菌条件下进行。此外，注射前应注意注射部位的消毒，以避免造成感染，导致不能成瘤。

一般而言，在保证细胞数量充足的条件下，尽可能的选择复苏后3-5代长势良好的细胞进行收集与注射。且，准备进行注射的细胞应使用无血清培养基或PBS进行重悬，且保证细胞充分混匀，以避免造成药物处理前生长的肿瘤体积差异过于明显。此外，细胞收集后应置于4℃环境中或冰面上以维持细胞低代谢状态。

于本发明的一实施例中，所述裸鼠的接种部位为背部、腋下、颈部中的至少一种。接种部位一般选择血管较密集的部位进行注射，如腋窝下(不要注射到腋窝深部，以腋窝中部外侧皮下最佳)、颈背部等，但值得注意的是应保证所选择的注射部位在成瘤后不妨碍裸鼠进行正常饮食与其它活动。

此外，由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针时，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，此过程不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，接种最好在1小时之内完成。