[发明专利]一种靶向CLL1的嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明提供了一种靶向CLL1的嵌合抗原受体及其应用，该嵌合抗原受体包含CLL1胞外抗原识别结构域、铰链区、跨膜区和细胞内结构域，CLL1胞外抗原识别结构域包括CLL1重链可变区和CLL1轻链可变区，其中，CLL1重链可变区的的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:56或SEQ ID NO:58所示抗体重链可变区中的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列相同，CLL1轻链可变区的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57或SEQ ID NO:59所示抗体轻链可变区中的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列相同。

技术领域

本申请涉及生物医药领域，具体涉及一种靶向CLL1的嵌合抗原受体及其应用。

背景技术

急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia，AML)是髓系造血干/祖细胞恶性疾病。以骨髓与外周血中的原始和幼稚髓系细胞异常增生为主要特征，临床表现为贫血、出血、感染和发热、脏器浸润、代谢异常等，多数病例病情危重，预后凶险，如不及时治疗常可危及生命。婴幼儿比成人易发生AML，本病占小儿白血病的30％。目前的治疗方法有：化疗、支持治疗、造血干细胞移植。

嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor，CAR)是CAR细胞治疗药物的核心部件，其可包括抗原识别结构域、铰链区、跨膜区和细胞内结构域。到目前为止，抗原识别结构域从抗体的单链可变区(Single Chain Variable Fragment，缩写为scFv)、或者从受体配体相互作用、TCR模拟物、可变的淋巴细胞受体(Variable Lymphocyte Receptors，VLR)衍生而来；其中最为常见的来源就是scFv抗体。CAR-T细胞免疫疗法，被认为是最有希望攻克肿瘤的手段之一。CAR-T细胞就是利用基因改造的方法使T细胞表达CAR蛋白，这种CAR蛋白有能力在不依赖于抗原提呈的情况下识别膜表面的完整蛋白，进而引起T细胞的活化和功能效应。目前，CAR-T细胞免疫疗法在多种血液系统肿瘤的治疗中取得了显著的成效，如：用于治疗B细胞淋巴瘤的CD19 CAR-T和用于治疗多发性骨髓瘤的BCMA CAR-T已有上市药物。然而，由于AML的异质性，较难发现治疗AML的理想CAR-T靶点，现有针对AML的靶点有CD33、CD123、LeY、NKG2D等，但这些靶点均未有上市的CAR-T药物。

研究发现，CLL1(C-type Lectin-like Molecule 1，C-型凝集素样分子-1)是有治疗AML前景的理想靶标，因为CLL1在正常造血干细胞中不表达，在AML原始细胞和白血病干细胞中高表达，因此寻找以CLL1为靶点的适合药物的嵌合抗原受体、尤其是以CLL1为靶点的适合CAR-T细胞治疗药物的嵌合抗原受体具有现实意义。

发明内容

本申请提供了一种靶向CLL1的嵌合抗原受体及其应用，发明人开发了多个靶向CLL1的抗体，并将其相应scFv抗体作为CLL1 CAR结构的胞外抗原识别结构域，以此构建了嵌合抗原受体表达载体、制备了靶向CLL1的CAR-T细胞，还在细胞水平验证了CLL1 CAR以及CLL1 CAR-T细胞的多项指标，并从中选择了表现最好的3种嵌合抗原受体。

本申请提供了一种靶向CLL1的嵌合抗原受体，其包含CLL1胞外抗原识别结构域、铰链区、跨膜区和细胞内结构域，所述CLL1胞外抗原识别结构域包括CLL1重链可变区和CLL1轻链可变区，其中：

所述CLL1重链可变区的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO:54所示抗体重链可变区中的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列相同，所述CLL1轻链可变区的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO:55所示抗体轻链可变区中的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列相同；