[发明专利]一种基质金属蛋白酶-3检测试剂盒及制备方法

说明书

本发明公开了一种基质金属蛋白酶‑3检测试剂盒及制备方法，检测试剂盒包括R1试剂、R2试剂。R1试剂包括：160～200mmol/L的HEPES缓冲液，60～80mmol/L的氯化钠，10～15mmol/L的氯化钙，1～5％的PEG‑6000，0.1～0.5％的曲拉通X‑100，0.09～0.12％的叠氮化钠，R1试剂的pH值为7.0～7.5；R2试剂包括：30～50mmol/L的HEPES缓冲液、15～20％的蔗糖、0.1％的包被人基质金属蛋白酶‑3抗体的胶乳微球、0.1～0.5％的吐温‑20、0.04～0.08％的PC‑300，R2试剂的pH值为7.0～7.5。R2试剂中包被人基质金属蛋白酶‑3抗体的胶乳微球为选用100～150nm及300～400nm两种规格的胶乳微球按一定比例混合而成。既保证低高值检测区均有较高的灵敏度和精准度，又保证试剂长期存储有足够的稳定性。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，特别是涉及一种基质金属蛋白酶-3检测试剂盒及制备方法。

背景技术

基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase 3，MMP-3)是一种主要由滑膜细胞、软骨细胞产生，能够破坏胶原、降解关节软骨的蛋白酶，在类风湿关节炎的骨破坏中发挥重要作用。有研究表明，血清MMP-3的水平与类风湿关节炎(RA)患者骨破坏程度相关。

研究表明，早期RA患者的MMP-3水平显著升高，即使在C-反应蛋白(CRP)和/或红细胞沉降率(ESR)正常的RA患者中，MMP-3水平也显著高于骨关节炎(OA)组和健康对照组。CRP和ESR是常用于评价RA疾病活动性的实验室指标，但病程较短的早期RA患者这些指标的变化不明显。在病程较短的RA患者中，MMP-3有较高的阳性率，病程6个月内的极早期RA患者MMP-3阳性率高于CRP，MMP-3对于CRP正常的患者有辅助诊断和评估的价值，尤其是在CRP或ESR这样的常用实验室指标正常的情况下，MMP-3较高的阳性率提示MMP-3水平的检测可以为早期RA患者的诊断提供帮助。

MMP-3常用的检测方法有：酶联免疫法(ELISA)、胶乳颗粒增强免疫比浊(PETIA)或是胶乳凝集法等。采用ELISA检测法，操作过程繁琐，复杂，无法开展高通量样本检测。使用PETIA或是胶乳凝集法，虽然克服了高通量样本检测的问题，但是目前现有的胶乳比浊检测试剂，对于低值范围区分度不高，临床样本的正常参考区间在低值范围，低值范围检测精准度不高往往影响结果判断。有些试剂为了达到较高的特异性和灵敏度，需要使用较大粒径胶乳微球，则又存在试剂稳定性较差的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基质金属蛋白酶-3检测试剂盒及制备方法，以既保证低高值检测区均有较高的灵敏度和精准度，又保证试剂长期存储有足够的稳定性。

一种基质金属蛋白酶-3检测试剂盒，包括R1试剂、R2试剂：

所述的R1试剂包括：160～200mmol/L的HEPES缓冲液，60～80mmol/L的氯化钠，10～15mmol/L的氯化钙，1～5％的PEG-6000，0.1～0.5％的曲拉通X-100，0.09～0.12％的叠氮化钠，R1试剂的pH值为7.0～7.5；

所述的R2试剂包括：30～50mmol/L的HEPES缓冲液、15～20％的蔗糖、0.1％的包被人基质金属蛋白酶-3抗体的胶乳微球、0.1～0.5％的吐温-20、0.04～0.08％的PC-300，R2试剂的pH值为7.0～7.5。；

上述基质金属蛋白酶-3检测试剂盒，其中，包被人基质金属蛋白酶-3抗体的胶乳微球为100～150nm及300～400nm两种规格的胶乳微球按一定比例混合而成。

上述基质金属蛋白酶-3检测试剂盒，其中，包被人基质金属蛋白酶-3抗体的胶乳微球为100～150nm及300～400nm两种规格的胶乳微球按照1：3～3：1的比例混合而成。