[发明专利]一种海洋贻贝消化腺组织病理损伤的定量方法

权利要求书

1.一种海洋贻贝消化腺组织病理损伤的定量方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）组织切片：

按照标准贻贝组织生理切片操作进行，包括：贻贝的培养，贻贝组织解剖与固定，组织脱水与透明化，组织包埋与透明化，切片、摊片与烤片，HE染色与封片，最终获得切片；

（2）显微观察：

用光学显微镜使用100×和400×两个不同倍数观察每张切片，检查合格后，对每张切片随机拍照获取至少100个消化腺细胞照片，获得消化腺数字图像，用于后续组织病理学分析；

（3）定量指标：以海洋贻贝消化腺管腔壁厚度作为海洋贻贝消化腺组织病理损伤定量检测指标，以正常海洋贻贝消化腺数字图像作为对照组进行定量测定，定量测定的方法为：将消化腺数字图像导入到图像软件处理，在图像软件中测量消化管壁厚，获得每张切片的测量值，对测得的原始数据进行统计分析；经统计分析获得的平均值作为定量指标，将测试组与对照组的定量指标进行比对，即可对海洋贻贝消化腺组织病理损伤进行定量分析。

2.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，步骤（1）中，HE染色与封片的具体步骤包括：脱蜡，至水，苏木精染色，分化反蓝，伊红染色，脱水及透明化。

3.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，步骤（1）中，对于每个处理组设置3个生物重复，对于每一个生物重复获得3张切片。

4.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，步骤（2）中，对每张切片随机拍照获取至少100个消化腺细胞照片是在400×放大倍数下进行的。

5.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，步骤（3）中，定量测定的方法具体为：将消化腺数字图像导入到图像软件Image J中，转化图片格式为灰度8 bit并调整图片对比度及明暗程度使组织结构清楚，使用Image J直线工具划线测量，在消化管壁上均匀选取5处位置进行划线测量；每次划线测量的结果对应一个厚度值，每张切片获得500个测量值；每个处理组共获得4500个测量值；使用SPSS软件对测得的原始数据进行统计分析。

6.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，步骤（3）中，消化腺数字图像分辨率在72像素/英寸以上。