[发明专利]一种硫酸葡聚糖用来培养CHO细胞系细胞的基础培养基当中的新应用

说明书

本发明公开了一种在用来培养CHO细胞系细胞的基础培养基当中的新应用，所述硫酸葡聚糖(DS)与精胺(SPM)添加入培养基中促进CHO细胞系细胞的生长；本发明可以在下游生产过程中在不影响培养基对细胞生长和表达的作用下解决溶解度问题，降低企业生产成本；另外DS在细胞培养中可以减少细胞聚集，促进CHO细胞生长，提高活率以及重组蛋白产量。

技术领域

本发明涉及生物细胞培养基技术领域，尤其涉及一种硫酸葡聚糖用来培养CHO细胞系细胞的基础培养基当中的新应用。

背景技术

中国仓鼠卵巢(CHO)细胞是重组治疗性蛋白(RTP)生产的首选表达系统，目前近70％的RTP由CHO细胞生成。特别是，CHO细胞用于生产重组治疗性蛋白和单克隆抗体(mAb)，如阿达木单抗、贝洛托单抗等。最早的动物源性细胞培养物中使用的培养基由血清(人或者胎牛)，血浆或者组织提取物营养样的组件，其过程复杂且成分不明确，易增加污染风险，普通CHO细胞培养通常需要10％胎牛血清，这会增加污染风险，不利于下游工艺中的蛋白纯化。因此，用于CHO培养的无血清培养基(SFM)是RTP生产所必需的。

不添加血清的情况下，培养基含有碳水化合物，氨基酸，维生素，微量金属和盐。这些组分在细胞生长中发挥关键作用。胰岛素，化学定义的脂质等蛋白质甚至于也通常是培养基的一部分。多胺是生物体代谢过程中产生的小分子脂肪族含氮碱，是腐胺，亚精胺，精胺和尸胺等的总称，它们广泛的参与细胞的基础代谢。精胺作为多胺的一种，在成分限定的培养基中起到提高表达支持细胞高密度生长的作用。精胺可以特异性的激活两种分裂原促蛋白激酶：水杨酸诱导性蛋白激酶和损伤诱导性蛋白激酶的活性。这一激活过程与线粒体功能的紊乱有关，并且依赖活性氧自由基的产生和Ca2+的外流，因为这种激活作用可以被抗氧化剂，多胺氧化酶抑制剂和Ca2+通道阻断剂所阻止。这两种基因蛋白酶主要参与防御基因的激活和抑制细胞凋亡作用。在生理PH条件下，精胺多为多聚阳离子，容易与细胞中的多聚阴离子如DNA，RNA，酸性磷脂，酸性蛋白质和细胞壁组分相结合，因此精胺在成分限定培养基中对细胞影响主要体现在调节酶蛋白，翻译转录以及细胞代谢水平的调节上。

硫酸葡聚糖(DS)是一种抗凝血剂、抗病毒药物和佐剂。硫酸葡聚糖可以通过减少细胞聚集，促进CHO细胞生长、提高活率以及重组蛋白产量。研究发现硫酸葡聚糖也具有抗凋亡特性，可以延长发生自噬的CHO细胞存活。硫酸葡聚糖可以通过降低星形孢菌素诱导的线粒体跨膜电位的破坏，来防止星形孢菌素处理过的CHO细胞凋亡。此外，硫酸葡聚糖也能减少释放到细胞质中的细胞色素C的量，抑制caspase-9前体和caspase-3前体。硫酸葡聚糖通过线粒体途径抑制CHO细胞的凋亡，未涉及caspase-8的活化。硫酸葡聚糖的抗凋亡作用是非特异性的，因为硫酸葡聚糖可同时减少细胞色素C释放入细胞质和线粒体跨膜电位破坏。预测硫酸葡聚糖在典型的细胞培养条件下也可能显示抗凋亡作用，其中凋亡因素可以是氧化应激，渗透压应激，代谢副产物积累以及营养或生长因子耗竭。

研究发现硫酸葡聚糖与精胺共同存在于同一种化学限定培养基时如果硫酸葡聚糖浓度过高会产生浊度过高，甚至沉淀现象，这大大影响成分限定培养基功效。并且在下游生产过程中掌握不好两者比例将产生严重的经济效益损失。

发明内容

本发明提供了一种硫酸葡聚糖用来培养CHO细胞系细胞的基础培养基当中的新应用，以解决现有技术的上述问题。

本发明的方案是：

一种硫酸葡聚糖与精胺联合添加用来培养CHO细胞系细胞的基础培养基当中的新应用，所述硫酸葡聚糖添加入培养基中促进CHO细胞系细胞的生长。

作为优选的技术方案，所述硫酸葡聚糖与精胺替换所述CHO细胞系细胞的基础培养基中的精胺使用。

作为优选的技术方案，CHO细胞系细胞包括CHO-K1、CHO-1、CHO-2、CHO-3、CHO-4与CHO-5。