[发明专利]一种革兰氏阴性菌选择性分离培养基及应用

权利要求书

1.一种革兰氏阴性菌选择性分离培养基，其特征在于：在基础培养基中包含联合使用苝醌化合物和/或其衍生物、过氧化物和金属螯合剂。

2.根据权利要求1所述的选择性分离培养基，其特征在于，所述基础培养基包括但不限于：营养琼脂(NA)固体培养基、平板计数琼脂(PCA)固体培养基、添加了琼脂的厌氧肉肝汤培养基、强化梭菌培养基(RCM)、假单胞菌选择性培养基(CFC)、乳酸菌培养基(MRS)、亚硫酸铁琼脂、气单胞菌选择性培养基(RYAN)。

3.根据权利要求1所述的选择性分离培养基，其特征在于，所述苝醌化合物包括：竹红菌素(hyporellines)、菌寄生菌素(hypomycins)、痂囊腔菌素(celsinochrome)尾孢菌素(Cercosporin)；所述苝醌化合物的衍生物包括苝醌化合物的甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、异丁酸酯、戊酸酯、己酸酯、庚酸酯、辛酸酯、丙烯酸酯、苯甲酸酯、苯乙酸酯、苯基丁酸酯、酒石酸酯、棒酸酯、柠檬酸酯、癸酸酯、延胡索酸酯、葡糖酸酯、谷氨酸酯、乙醇酸酯、乳酸酯、月桂酸酯、苹果酸酯、马来酸酯、丙二酸酯、油酸酯、草酸酯、棕榈酸酯、泛酸酯、琥珀酸酯。

4.根据权利要求1-3任其一所述的选择性分离培养基，其特征在于，所述选择性分离培养基的使用条件为：25-40℃，可见光光照培养；光照强度10-8000lux，波长范围390-780nm。

5.根据权利要求1-4任其一所述的选择性分离培养基的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：基础培养基灭菌前或后添加复合液，所述复合液中成分包括苝醌类化合物、过氧化物和金属螯合剂。

6.根据权利要求5所述的选择性分离培养基的制备方法，其特征在于，所述苝醌类化合物的添加终浓度为1-1000μg/mL，所述过氧化物添加终浓度为1-1000μmol/mL，所述金属螯合剂添加终浓度为1-1000μg/mL。

7.根据权利要求5所述的选择性分离培养基的制备方法，其特征在于，所述苝醌类化合物为hyporelline A和/或hyporelline B；所述过氧化物为过氧化氢和/或过氧化钙；所属金属螯合剂选自EDTA钠盐、NTA钠盐、IDS钠盐、HEDP、DTPA或者上述任意二者以上的混合物。

8.根据权利要求6所述的选择性分离培养基的制备方法，其特征在于，所述苝醌类化合物、过氧化物和金属螯合剂的添加终浓度分别为50μg/mL、20μmol/mL和100μg/mL。

9.根据权利要求5-8任其一所述的选择性分离培养基的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1)将苝醌类化合物溶解于二甲基亚砜中，配置浓度为10mg/mL的溶液，过滤除菌，得到苝醌类化合物母液；将过氧化物和金属螯合剂分别溶解在无菌去离子水中，配置浓度分别为10mmol/mL和100mg/mL的过氧化物母液和金属螯合剂母液；

2)配置基础培养基；

3)在基础培养基中充分混合苝醌类化合物和金属螯合剂母液，使得苝醌类化合物的最终浓度为1-1000μg/mL，金属螯合剂添加终浓度为1-1000μg/mL；培养基经过115-121℃灭菌15-30min，冷却至50℃，在无菌环境中添加过氧化物母液，使得最终浓度为1-1000μmol/mL，倒平板；或者基础培养基经过115-121℃灭菌15-30min，冷却至50℃在无菌环境中加入三种母液并混合，使得苝醌类化合物、过氧化物和金属螯合剂的最终浓度分别为1-1000μg/mL、1-1000μmol/mL和1-1000μg/mL。

10.利用权利要求1-4任其一所述的选择性分离培养基或者利用权利要求5-9任其一所述的选择性分离培养基的制备方法得到的选择性分离培养基的使用方法，其特征在于，所述方法不用于诊断目的，具体包括：将待测样品稀释后接种于选择性分离培养基，25-37℃、可见光照培养24-72小时后，观察菌种生长情况；任选地，对菌株进行基因鉴定；优选地，所述样品来源于水产品、食品、土壤以及水。