[发明专利]OsJMJ711基因在改良水稻每穗粒数性状中的应用

权利要求书

1.OsJMJ711基因在改良水稻每穗粒数性状中的应用，所述OsJMJ711基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种改良水稻每穗粒数性状的方法，其特征在于，是利用CRISPR/Cas9基因编辑技术定点编辑水稻OsJMJ711基因的靶位点；

所述OsJMJ711基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述靶位点的序列为：5’-GTCCAGGGTTGACCAGTGCC-3’。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，具体是：将所述OsJMJ711基因的靶位点连入表达载体pRGEB32，构建重组表达载体；通过农杆菌介导法将所述重组表达载体转染至待转化植物材料中，得到每穗粒数性状改良的基因编辑定点敲除水稻植株。

4.一种每穗粒数性状改良水稻的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、在所述OsJMJ711基因的第六个外显子处设计并得到靶位点序列，针对所述靶位点序列合成gRNA引物序列；

S2、将所述gRNA引物序列连入经BsaI酶切后的pRGEB32载体，将连接产物转化至大肠杆菌感受态，构建含有OsJMJ711基因gRNA序列的表达载体；

S3、将所述含有OsJMJ711基因gRNA序列的表达载体转入农杆菌，获得重组农杆菌；

S4、通过农杆菌介导法将所述重组农杆菌转染至待转化水稻品系，经选择、分化、生根、炼苗、移栽，获得每穗粒数性状改良的水稻植株。

5.根据权利要求4所述的培育方法，其特征在于，所述gRNA引物序列为：5’-GTCCAGGGTTGACCAGTGCC-3’。

6.根据权利要求4所述的培育方法，其特征在于，S2的具体操作步骤为：

将gRNA引物序列片段经解链发生双链化，获得双链gRNA序列片段；将所述双链gRNA序列片段与经BsaI酶切后的pRGEB32载体按摩尔比3～5∶1混合，在T4 DNA连接酶作用、16℃下连接3h，构建含有OsJMJ711基因gRNA序列的表达载体。

7.根据权利要求4所述的培育方法，其特征在于，S3的具体操作步骤为：将S2构建得到表达载体转化大肠杆菌感受态，提取转化后的大肠杆菌质粒，将其再次转化大肠杆菌感受态，并提取大肠杆菌质粒进行测序，测序后含有OsJMJ711基因gRNA序列的载体为重组农杆菌。

8.根据权利要求4所述的培育方法，其特征在于，S4的具体操作步骤为：通过农杆菌介导法将所述重组农杆菌转染至待转化水稻品系，通过组织培养获得水稻再生苗，通过PCR扩增获得含有靶位点的OsJMJ711基因片段，测序确认获得OsJMJ711基因突变的水稻植株。

9.根据权利要求8所述的培育方法，其特征在于，所述PCR采用的引物序列为：

正向引物：5’-TGGAAGATTACAGTGTCCCTCA-3’；

反向引物：5’-ACTTCCCACTGAATGTGCCC-3’。