[发明专利]活性聚集肽及其应用

权利要求书

1.一种活性聚集肽，其特征在于：其氨基酸序列为如下任一序列所示：

HlyA218：GNSLAKNVLSGGKGNDKLYGSEGADLLDGGEGNDLLKGGYGNDIYRYLSGYGHHIIDDDGGKDDKLSLADIDFRDVAFRREGNDLIMYKAEGNVLSIGHKNGITFRNWFEKESGDISNHQIEQIFDKDGRVITPDSLKKALEYQQSNNKASYVYGNDALAYGSQDNLNPLINEISKIISAAGNFDVKEERAAASLLQLSGNASDFSYGRNSITLTASA；

HlyA60：LAYGSQDNLNPLINEISKIISAAGNFDVKEERAAASLLQLSGNASDFSYGRNSITLTASA；

H12：QDNLNPLINEISKIISAAGNFDVKEERAAASLLQLS；

H1：QDNLNPLINEISKIISAA；

H2：ERAAASLLQLS。

2.权利要求1中所述的活性聚集肽在高效介导形成重组蛋白活性包涵体中的应用。

3.一种重组蛋白活性包涵体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将重组表达构建体导入宿主细胞中，获得重组细胞；所述重组表达构建体包括编码融合蛋白的多核苷酸序列与表达控制序列；所述融合蛋白包括目的蛋白、构建在目的蛋白羧基端的权利要求1中所述的活性聚集肽以及目的蛋白与活性聚集肽之间的连接肽；

(2)培养步骤(1)所得重组细胞，表达所述融合蛋白，获得包含融合蛋白的活性包涵体。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的表达控制序列为启动子、增强子、核糖体作用位点、聚腺苷酸化位点、转录剪接序列、转录终止序列和稳定mRNA的序列中的任意一种或多种组合；

步骤(2)的具体操作为：将步骤(1)所得重组细胞进行培养，收获的细胞经裂解后去除上清，收集不可溶部分，获得包含融合蛋白的活性包涵体。

5.一种重组蛋白活性包涵体，其特征在于：通过权利要求3或4的制备方法得到。

6.一种重组蛋白包涵体的纯化方法，其特征在于：包括如下步骤：利用两步洗涤法对权利要求5中所述的重组蛋白活性包涵体进行纯化，获得纯化后的融合蛋白；所述两步洗涤法包括如下步骤：

第一步：使用含TritonX-100的磷酸钠缓冲液重悬活性包涵体，置冰上孵育20±2min；

第二步：离心去除上清后使用磷酸钠缓冲液洗涤活性包涵体；

所述TritonX-100在体系中的体积浓度为0.8±0.1％；

所述磷酸钠缓冲液的浓度为50±5mM，pH为7.0±0.2；

所述离心的条件为转速12000±1000rpm、温度4±2℃、时间5±2min。

7.一种重组蛋白，其特征在于：由目的蛋白、构建在目的蛋白羧基端的权利要求1中所述的活性聚集肽以及目的蛋白与活性聚集肽之间的连接肽组成。

8.根据权利要求7所述的重组蛋白，其特征在于：所述目的蛋白为酶蛋白，所述重组蛋白为重组酶蛋白。

9.权利要求8中所述的重组酶蛋白作为原位固定化酶在生物催化反应中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：

所述重组酶蛋白重复回收利用至少30次。