[发明专利]一种提高眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30表达量的诱导方法

说明书

本发明提供了一种提高眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30表达量的诱导方法，用于诱导表达的培养基配方是每1000mL体系中，包括：葡萄糖20g，二水硫酸钙0.186g，硫酸钾3.6g，七水硫酸镁2.98g，氢氧化钾0.826g，85%磷酸5.34ml，PTM1 4ml，氨基酸10g，余量为去离子水，上述氨基酸为组氨酸、苏氨酸与组氨酸组合氨基酸、亮氨酸与组氨酸组合氨基酸或苏氨酸与亮氨酸组合氨基酸。将含有表达质粒的毕赤酵母菌接种至上述培养基中，29℃培养18小时就可进入诱导阶段，诱导阶段29℃培养24h‑48h，然后将菌液离心取上清液，过0.22μm滤膜后得到表达量提高的表达液。本发明的诱导方法能够明显提高表达量，分别为添加组氨酸的培养基提高诱导表达量2.7%左右，添加组氨酸与苏氨酸的氨基酸组合物培养基提高诱导表达量80%左右。

技术领域

本发明涉及基因工程生物技术领域，具体地，涉及一种提高眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30表达量的诱导方法。

背景技术

cathelicidins是一种在先天免疫系统中发挥重要作用的阳离子宿主防御肽，眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30为cathelicidins的截短肽，由30个氨基酸序列组成，目前研究发现其对大肠杆菌（Escherichia coli）、铜绿假单胞菌（Pseudomona aeruginosa）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)等多种革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有较好的抑菌效果。

目前基因工程制备眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30诱导表达实验中发现，本重组毕赤酵母在BMGY中可以分泌表达眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30，但在BSM培养基中几乎不分泌表达，且酵母生长速度较慢。为解决这一问题，现提出一种通过添加复合成分在BSM培养基中以提高眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30表达量的诱导方法。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种提高眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30表达量的诱导方法，该方法能够提高重组毕赤酵母的生长速度，增加其分泌表达眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30。

本发明的目的是通过以下方案实现的：

本发明提供一种提高眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30表达量的诱导方法，其主要步骤如下：

S01：制备诱导表达培养基，按照常规实验方法先配制YPD基础培养基,再配制BSM培养基，得到BSM培养基，所述BSM培养基的每1000mL体系中，培养基组成包括：葡萄糖20g，二水硫酸钙0.186g，硫酸钾3.6g，七水硫酸镁2.98g，氢氧化钾0.826g，85%磷酸5.34ml，PTM14ml，氨基酸10g，余量为去离子水。

S02：对眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30进行表达实验，将含有表达质粒的毕赤酵母菌接种至S01制得的培养基中，29℃培养18小时就可进入诱导阶段，诱导阶段29℃培养24h-48h，然后将菌液离心取上清液，过0.22μm滤膜后得到表达量提高的表达液。

优选的，所述S01步骤中BSM培养基中的氨基酸为组氨酸、苏氨酸与组氨酸组合氨基酸、亮氨酸与组氨酸组合氨基酸或苏氨酸与亮氨酸组合氨基酸。

本发明有益效果为：本发明的诱导表达方法能够明显提高毕赤酵母的生长速度，较快的进入诱导阶段，添加组氨酸的培养基提高诱导表达量2.7%左右，添加组氨酸与苏氨酸的氨基酸组合物培养基提高诱导表达量80%左右，且有明显的抑菌效果。

附图说明：

图1：添加组氨酸、组氨酸与苏氨酸组合氨基酸、对照组的3种诱导48h表达液的高效液相色谱检测图。

具体实施方式：