[发明专利]一种提高诱导眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30表达效率的培养基及其配制方法

说明书

本发明提供了一种提高诱导眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30表达效率的培养基、配制方法，所述培养基的每1000mL体系中，培养基组成包括：葡萄糖20g，二水硫酸钙0.186g，硫酸钾3.6g，七水硫酸镁2.98g，氢氧化钾0.826g，85%磷酸5.34ml，PTM1 4ml，氨基酸10g，余量为去离子水，上述氨基酸为组氨酸、亮氨酸、缬氨酸或苏氨酸。使用本发明的培养基，利用毕氏酵母菌表达重组蛋白时，能够明显提高毕赤酵母的生长速度，生长18h后即可进入诱导阶段，显著提高眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30诱导表达效率，且诱导表达后得到的重组蛋白的活性和稳定性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种提高诱导眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30表达效率的培养基及其配制方法。

背景技术

cathelicidins是一种在先天免疫系统中发挥重要作用的阳离子宿主防御肽，眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30为cathelicidins的截短肽，由30个氨基酸序列组成，目前研究发现其对大肠杆菌（Escherichia coli）、铜绿假单胞菌（Pseudomona aeruginosa）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)等多种革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有较好的抑菌效果。

目前眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30基因工程表达制备方法中，表达常用的培养基是BSM培养基，以BSM为基础培养基高密度培养毕赤酵母时，存在酵母生长速度较慢、蛋白表达量低等缺点。在眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30制备过程中，发现蛋白表达水平较低，且生物活性也降低了。基于上述表达过程中存在的问题，亟需通过调整优化培养基成分、培养条件等技术来加快毕赤酵母生长速度，提高诱导眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30表达效率、增加表达量及提高产物稳定性。

发明内容：针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种提高诱导眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30表达效率的培养基及其配制方法。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种提高诱导眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30表达效率的培养基及其配制方法。

本发明的目的是通过以下方案实现的：

本发明第一方面提供一种提高诱导眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30表达效率的培养基配方，所述培养基的每1000mL体系中，培养基组成包括：葡萄糖20g，二水硫酸钙0.186g，硫酸钾3.6g，七水硫酸镁2.98g，氢氧化钾0.826g，85%磷酸5.34ml，PTM1 4ml，氨基酸10g，余量为去离子水。可用于提高眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30诱导表达效率。

优选的，所述氨基酸为组氨酸、亮氨酸、缬氨酸或苏氨酸。

本发明的第二方面提供一种上述所述的提高诱导眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30表达效率的培养基的配制方法，包括如下步骤：

S1：按常规方法配制将除上述氨基酸和PTM1的培养基配方，所述除氨基酸和PTM1的培养基配方材料灭菌后待用。

S2：含氨基酸培养基的配制，将氨基酸按10g/L的添加量称量好，添加至上述S1中待用的BSM培养基中，振荡、加热使其溶解。

S3：调pH和抽滤，在无菌室中，加入氨水将pH调至5.0后，在超净工作台抽滤后添加4ml的PTM1，用灭菌去离子水定容至1000mL得到用于提高诱导眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30表达效率的培养基。