[发明专利]一种短糖链修饰的IsPETase及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种制备短糖链修饰IsPETase的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、构建IsPETase多拷贝串联表达载体；

步骤二、将IsPETase多拷贝表达载体转染宿主细胞，发酵后收集上清；其中所述宿主细胞为真核生物细胞；

步骤三、采用滤膜过滤上清，然后加入Endo H进行反应。

2.根据权利要求1所述制备短糖链修饰IsPETase的方法，其特征在于，所述IsPETase多拷贝串联表达载体的IsPETase基因拷贝数为2～4。

3.根据权利要求2所述制备短糖链修饰IsPETase的方法，其特征在于，步骤一具体为：将IsPETase基因构建至表达载体中获得单拷贝表达载体，然后将单拷贝表达载体中的表达盒式结构用BamHI和SpeI切割回收后，再连接到用XbaI线性化的单拷贝表达载体中获得2拷贝表达载体，重复上述方法即可获得更多拷贝数的表达载体。

4.根据权利要求1所述制备短糖链修饰IsPETase的方法，其特征在于，所述IsPETase的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，或其氨基酸序列为在SEQ ID NO:1所示序列中存在一个或多个氨基酸的缺失、添加和/或取代但功能结构域相同的序列。

5.根据权利要求1所述制备短糖链修饰IsPETase的方法，其特征在于，所述宿主细胞为毕赤酵母。

6.根据权利要求5所述制备短糖链修饰IsPETase的方法，其特征在于，步骤二所述发酵为高密度发酵，具体为：将菌株扩培后转移至含有BSM培养基的发酵罐中，待甘油耗尽后向发酵罐中补充含PTM1微量盐的甘油，并将DO维持在20％以上，当发酵罐中细胞的湿重增加至180g/L以上时，加入甲醇诱导表达。

7.根据权利要求6所述制备短糖链修饰IsPETase的方法，其特征在于，所述甲醇的终浓度为5～10mL/L。

8.根据权利要求1所述制备短糖链修饰IsPETase的方法，其特征在于，Endo H的加入量为0.1～1.0wt％，且反应条件为28～37℃、0.5～2h。

9.根据权利要求1～8任一项所述方法制备的短糖链修饰的IsPETase。

10.如权利要求9所述短糖链修饰的IsPETase在PET塑料降解中的应用。