[发明专利]一种利用表面增强拉曼光谱对结肠癌生物标志物进行检测的方法

权利要求书

1.一种利用表面增强拉曼光谱对结肠癌生物标志物进行检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：使结肠癌生物标志物CEA标准品溶液与经4-MPBA修饰过的二维银板充分接触，后加入经CEA抗体功能化修饰的Au@4MBN@Ag NPs作为CEA的SERS探针共同孵育，最后用PBS冲洗二维银板，待其自然干燥后进行SERS检测。

2.根据权利要求1所述一种利用表面增强拉曼光谱对结肠癌生物标志物进行检测的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)制备4-MPBA修饰的二维银板；

(2)制备Au@4MBN@Ag NPs-COOH-CEA抗体探针；

(3)使4-MPBA修饰的二维银板与配制的CEA标准样品充分接触后用PBS冲洗，加入BSA溶液反应30min后接着加入Au@4MBN@Ag NPs-COOH-CEA抗体探针共同孵育，随后再次用PBS冲洗二维银板，以除去没有结合上CEA的SERS探针，等待自然干燥后进行SERS测试，并得到工作曲线；

(4)血浆样品检测，使4-MPBA修饰的二维银板与含有CEA血浆样品充分接触后用PBS冲洗，加入BSA溶液反应30min后接着加入Au@4MBN@Ag NPs-COOH-CEA抗体探针共同孵育，随后再次用PBS冲洗二维银板，以除去没有结合上CEA的SERS探针，等待自然干燥后进行SERS测试，将对应的特征峰强度带入步骤(3)中得到的工作曲线中计算得出血浆样品中CEA的含量。

3.根据权利要求2所述一种利用表面增强拉曼光谱对结肠癌生物标志物进行检测的方法，其特征在于，步骤(1)的具体步骤为：按V(H2SO4):V(H2O2)＝7:3配制“食人鱼”溶液，将玻璃片超声清洗、烘干后与“食人鱼”溶液在90℃下反应50分钟后，使用乙醇和水反复冲洗玻璃片，除去多余的“食人鱼”溶液；再将反应后的玻璃片浸没15％APTES溶液并在室温下反应24小时，将玻璃片取出并用乙醇和水反复冲洗后放入烘箱于120℃下缩合反应40min后，将玻璃片浸没在1mL的Ag NPs溶液放置24小时后，取出并用超纯水冲洗除去多余的Ag NPs，得到二维银板，再将二维银板浸在4-MPBA溶液中浸泡规定时间，将4-MPBA修饰到二维银板上。

4.根据权利要求2或3所述一种利用表面增强拉曼光谱对结肠癌生物标志物进行检测的方法，其特征在于，步骤(2)的具体步骤为：将1mL Au@4MBN@Ag NPs加入SH-PEG-COOH溶液，搅拌反应30min后进行第一次离心，接着分别加入20μL 10mg/mL1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和10μL 10mg/mL N-羟基琥珀酰亚胺溶液活化羧基，第二次离心重分散在PBS中后加入CEA抗体，室温下连续震荡2小时后，移到4℃下孵育24小时，离心重分散，得到Au@4MBN@Ag NPs-COOH-CEA抗体溶液。

5.根据权利要求4所述一种利用表面增强拉曼光谱对结肠癌生物标志物进行检测的方法，其特征在于，所述Ag NRs合成步骤如下：将35mg AgNO₃加入200mL水中，加热至沸腾后加入10mL 1％柠檬酸三钠，搅拌反应1小时，即得到灰绿色的Ag NRs溶液，将得到的溶液离心后洗涤两次，用超纯水分散，备用。

6.根据权利要求5所述一种利用表面增强拉曼光谱对结肠癌生物标志物进行检测的方法，其特征在于：所述Au@4MBN@Ag NPs的合成方法为：将柠檬酸钠加入沸腾的HAuCl₄中剧烈搅拌15min生成金核；随后加入4-腈基硫酚形成Au-S共价键，磁力搅拌30min，离心后重分散，随后逐滴加入AgNO₃溶液和抗坏血酸，搅拌60min，离心后得Au@4MBN@Ag NPs。