[发明专利]具有DPP-IV抑制作用的臭鳜鱼源活性肽

说明书

本发明公开了具有DPP‑IV抑制作用的臭鳜鱼源活性肽，涉及食品生物技术领域。该活性肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。本发明从自然发酵生产的臭鳜鱼产品中筛选得到了两种具有明显DPP‑IV抑制活性的肽，这两种肽与DPP‑IV的对接能量分别为‑118.828kcal/mol和‑111.038kcal/mol，对DPP‑IV的ICsubgt;50/subgt;分别为0.115mg/mL和3.058mg/mL，与已报到的DPP‑IV抑制肽相比具有明显的优势，可用于制备改善胰岛素缺乏或胰岛素抵抗症状的保健品和功能食品，具有广阔的市场应用前景。

技术领域

本发明涉及食品生物技术领域，特别是涉及具有DPP-IV抑制作用的臭鳜鱼源活性肽。

背景技术

II型糖尿病是一种血糖调节紊乱的代谢疾病，目前由于人们不良的饮食习惯，II型糖尿病患者正向低龄化发展并呈急剧攀升趋势，预计到2045年可占超6亿糖尿病患者的90％～95％。II型糖尿病主要表现为胰岛素抵抗和胰岛素缺乏，胰高血糖素样肽-1是由小肠分泌，它的活性形式在胰细胞葡萄糖依赖性胰岛素的生物合成和分泌中发挥着重要作用，但是活性胰高血糖素样肽-1会被二肽基肽酶-IV(DPP-IV)快速降解而失去活性，从而抑制胰岛素的分泌，致使血糖升高。

食物源的DPP-IV抑制肽具有良好的降血糖效果，可以作为治疗高血糖化学合成药物的潜在替代品。DPP-IV抑制肽中脯氨酸残基对于其抑制活性具有重要作用。传统的DPP-IV抑制肽筛选方法是利用商品化蛋白酶水解食物蛋白，然后利用分离纯化方式获得肽，通过质谱分析获得抑制肽的结构。这种筛选方法的通量低、效率低、操作复杂、耗时耗力，分离纯化获得的DPP-IV抑制肽的纯度较低。而且由于商品化蛋白酶水解位点固定，水解得到的多肽片段的多样性降低，大大降低了获得高活性新型DPP-IV抑制肽的可能性。臭鳜鱼是一种以鳜鱼为原料制作的传统水产发酵食品。臭鳜鱼中的微生物菌群结构复杂，且能够分泌多种多样的蛋白酶，因此会产生更为丰富多样的肽序列。而且，鳜鱼蛋白中富含脯氨酸，为高活性DPP-IV抑制肽的制备提供了可能。

发明内容

本发明的目的是提供具有DPP-IV抑制作用的臭鳜鱼源活性肽，以解决上述现有技术存在的问题，这两种臭鳜鱼源活性肽具有明显DPP-IV抑制活性，与DPP-IV的对接能量分别为-118.828kcal/mol和-111.038kcal/mol。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供具有DPP-IV抑制作用的活性肽，所述活性肽的氨基酸序列如SEQ IDNO.1或SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供一种上述的活性肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)鳜鱼经自然发酵得到臭鳜鱼；

(2)利用盐酸提取法，从所述臭鳜鱼中提取得到多肽提取物；

(3)所述多肽提取物经脱盐处理后，利用超高效液相四级杆高分辨串联质谱鉴定得到所述活性肽。

进一步地，步骤(1)的具体操作包括：将鳜鱼去鳞、去鳃、去内脏，清洗后置于发酵容器中，加入盐水，自然发酵，得到所述臭鳜鱼。

进一步地，所述盐水的浓度为6-7wt％。

进一步地，所述自然发酵的温度为10-18℃，时间为4-12d。

进一步地，所述盐酸提取法所使用的盐酸溶液的浓度为0.01mol/L。

进一步地，所述盐酸提取法的盐酸浸提时间为20-40min。

本发明还提供上述的活性肽在制备改善胰岛素缺乏和/或抵抗症状的产品中的应用。

本发明还提供一种改善胰岛素缺乏和/或抵抗症状的产品，所述产品的活性成分包括上述的活性肽。