[发明专利]适用于NK细胞的培养基组合物及培养方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种适用于NK细胞的培养基组合物及培养方法。该培养基组合物包含基础培养基、3v/v％～10v/v％的血清、IL2、IL18和非细胞因子类促炎因子。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种适用于NK细胞的培养基组合物及培养方法。

背景技术

自然杀伤细胞(natural killer cell，NK细胞)是重要的淋巴细胞亚群，在人体的先天免疫系统中起着重要的作用，人成熟NK纸胞的主要来源是外周血。早在70年代，科研人员就对它们进行了描述，但直到最近的15年，人们才逐渐了解NK细胞在帮助抗击癌症和其它疾病方面的复杂性和治疗潜力。由于NK细胞仅占外周血单个核细胞的5％～10％，因此NK细胞的纯化及体外扩增是对NK细胞基础与临床研究的重要方法学基础。

但是由于来源于外周血的NK细胞难以在体外大量扩增，而且从外周血中分离纯化NK细胞有一定的技术难度，难以避免淋巴细胞的污染，无法获取大量均一的NK细胞并达到临床所需的标准，故NK细胞还不能广泛应用于临床；另外，在有些病例中，NK细胞介导的抗肿瘤反应弱，可能与NK细胞杀伤能力、在体内存活能力差或向肿瘤部位迁移受限等因素有关。

因此，总得来说，目前NK细胞的纯化培养效果仍不够理想，不能满足实际应用。

发明内容

本发明提供一种适用于NK细胞的培养基组合物，包含基础培养基、3v/v％～10v/v％的血清、IL2、IL18和非细胞因子类促炎因子。

根据本发明的再一方面，还提供一种适用于NK细胞的培养基组合套件，其包括如上所述的适用于NK细胞的培养基组合物以及CD3抗体。

根据本发明的再一方面，还提供一种NK细胞培养方法，其包括如下步骤：

a)将单个核细胞接种含CD3抗体的容器中，并使用如上所述的NK细胞的培养基组合物培养3～5天；

b)在不含CD3抗体的容器中，使用如上所述的NK细胞的培养基组合物培养9～11天。

本发明所提供的培养基组合物，成分简单明确，培养得到的NK细胞纯度更高，且具有更快的增殖效率与很强的细胞杀伤能力，特别是本发明意外发现，添加了血清淀粉样蛋白A的组别能够显著提高NK细胞的杀伤能力。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为NK细胞培养的光镜代表图；A为实施例1；B为实施例2；C为对比例；

图2为本发明实施例1的流式细胞分析结果；

图3为本发明实施例2的流式细胞分析结果；

图4为对比例的流式细胞分析结果；

图5为不同实施方式所对应的细胞增殖曲线；

图6为不同实施方式所对应的NK细胞的杀伤能力检测。

具体实施方式

现将详细地提供本发明实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本发明。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本发明进行多种修改和变化而不背离本发明的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。