[发明专利]一种模拟人体肿瘤微环境的CIC细胞及制备方法、分选方法有效
| 申请号： | 202211006160.8 | 申请日： | 2022-08-22 |
| 公开（公告）号： | CN115141805B | 公开（公告）日： | 2023-10-27 |
| 发明（设计）人： | 苏芳;魏宜胜;梁志华;周亚光;张啸;姚伟城 | 申请（专利权）人： | 中山大学孙逸仙纪念医院;广州医科大学附属第二医院 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09;C12N5/071;C12N5/078 |
| 代理公司： | 成都华亿智合知识产权代理事务所(普通合伙) 51354 | 代理人： | 张和平 |
| 地址： | 510130 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 模拟 人体 肿瘤 环境 cic 细胞 制备 方法 分选 | ||
1.一种模拟人体肿瘤微环境的CIC细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
按效靶比为1：(1～3)提供人外周血淋巴细胞和肿瘤细胞；以及
将人外周血淋巴细胞和肿瘤细胞在培养箱中共孵育，即得CIC细胞；
其中，所述培养箱的培养温度为30～42℃，培养箱中二氧化碳浓度为1～10％。
2.根据权利要求1所述的模拟人体肿瘤微环境的CIC细胞的制备方法，其特征在于：所述人外周血淋巴细胞和肿瘤细胞的效靶比为1：(1.5～2.5)；所述培养箱的培养温度为34～39℃，培养箱中二氧化碳浓度为3～7％。
3.根据权利要求1所述的模拟人体肿瘤微环境的CIC细胞的制备方法，其特征在于：所述人外周血淋巴细胞和肿瘤细胞的效靶比为1：(1.9～2.1)；所述培养箱的培养温度为36～38℃，培养箱中二氧化碳浓度为4.5～5.5％。
4.根据权利要求1～3任一项所述的模拟人体肿瘤微环境的CIC细胞的制备方法，其特征在于：所述人外周血淋巴细胞的制备过程包括：
步骤一、将外周血与淋巴细胞分离液混合后离心，即得人外周血单个核细胞；
步骤二、将人外周血单个核细胞重悬后活化培养，即得人外周血淋巴细胞。
5.根据权利要求4所述的模拟人体肿瘤微环境的CIC细胞的制备方法，其特征在于：所述人外周血淋巴细胞的制备过程包括：
步骤一、将外周血、PBS缓冲液、淋巴细胞分离液混合后离心，即得人外周血单个核细胞；
步骤二、将人外周血单个核细胞离心，加入胎牛血清培养基中重悬后活化培养，即得人外周血淋巴细胞。
6.根据权利要求5所述的模拟人体肿瘤微环境的CIC细胞的制备方法，其特征在于：所述外周血、PBS缓冲液、淋巴细胞分离液的体积比为1：(0.8～1.2)：(1.6～2.4)。
7.一种模拟人体肿瘤微环境的CIC细胞的分选方法，其特征在于，包括如下步骤：
将人外周血淋巴细胞和肿瘤细胞分别染色；
将染色后的人外周血淋巴细胞和肿瘤细胞按照权利要求1～6任一项所述的制备方法进行制备CIC细胞；以及
将培养后的CIC细胞制成单细胞悬液，上机分选呈双荧光阳性的细胞，即得CIC细胞。
8.根据权利要求7所述的模拟人体肿瘤微环境的CIC细胞的分选方法，其特征在于：所述人外周血淋巴细胞和肿瘤细胞采用不同颜色的荧光染料进行染色。
9.根据权利要求7或8所述的模拟人体肿瘤微环境的CIC细胞的分选方法，其特征在于：所述人外周血淋巴细胞采用绿色荧光染料进行染色；所述肿瘤细胞采用红色荧光染料进行染色。
10.一种模拟人体肿瘤微环境的CIC细胞，其特征在于：所述CIC细胞由权利要求1～6任一项所述的制备方法制备而成。
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