[发明专利]牛白血病病毒抗体及检测试剂盒

说明书

本发明涉及牛白血病病毒BLV P24单克隆抗体及其活性片段，其靶向牛白血病病毒的P24蛋白主要中和表位。本发明还涉及使用BLV P24单克隆抗体或其活性片段用于预防和治疗牛白血病病毒引起的牛白血病的方法和组合物，以及确定、鉴别和/或定量样品或疫苗中的牛白血病病毒BLV的方法和试剂盒。

技术领域

本发明涉及一种病毒抗体及病毒检测试剂盒，具体针对牛白血病病毒的抗体及检测试剂盒。

背景技术

牛白血病病毒(bovine leukemia virus，BLV)是一种可以感染许多反刍动物的逆转录病毒。其感染的主要宿主是奶牛和绵羊，并可引起地方流行性牛白血病(enzooticbovine leukosis，EBL)，主要临床症状表现为淋巴细胞恶性增生，奶牛的产奶量降低以及肉牛的进行性消瘦等。该病在欧洲、美国和日本等许多国家均有报道，给养牛业产生了较大危害。我国上世纪70年代，在上海首次发现该病后，全国许多省份均有报道。最近，Yang Yet al对我国15个省份进行牛白血病调查研究，发现BLV在临床感染比较严重，其感染可降低奶牛产奶量，对我国养牛业和奶业产生了严重危害；2015年对黑龙江省6大城市的临床检测表明，BLV呈普遍感染趋势，部分地区感染严重，感染率超过50％。值得注意的是，近期有人乳腺组织中检出BLV前病毒DNA的报道，证明人乳腺癌病例与BLV感染相关。因此，控制BLV的感染不仅对畜牧业生产有重要意义，对公共生物安全也有重要意义。目前，临床上尚无有效的用于BLV防治的疫苗。我国以及美国和日本等国家BLV的防控以检测为主，隔离淘汰病患宿主，欧盟国家以检测扑杀方式避免该病的感染传播。

BLV感染的检测可以进行病毒核酸和抗原检测以及宿主体内该病毒的抗体检测。病毒核酸检测方法主要是检测病毒在宿主体内的前病毒DNA，可以应用巢式PCR方法和荧光定量PCR方法。目前，有许多BLV前病毒核酸检测的方法的文章发表。存在的问题是，在实验室范围内应用这些检测方法尚可。而大规模样本检测，这些方法对临床技术操作人员的专业水平要求较高，且一旦管理控制不严格，容易造成小范围检测环境DNA污染，给检测结果准确性带来很大影响。

市场范围内，已经成型的检测试剂盒均是应用检测宿主体内该病毒的抗体水平，尚无直接检测该病毒抗原的试剂盒，部分原因为该病毒在宿主体内是低水平复制，抗原量很低，对试剂盒研发的灵敏度要求极高。宿主体内针对BLV GP51囊膜蛋白和P24衣壳蛋白的抗体水平最高，易于临床检测。目前，BLV GP51抗体检测试剂盒已经商业化，主要是国外一些试剂公司生产研发完成，检测效果比较理想，但是检测费用价格昂贵，对于种群的长期连续性检测，需要具有一定的的经济实力。国内也有简易检测BLV GP51抗体的试剂盒，对于种群的初步筛选检测有较好效果。然而对于需要达到种群净化的目标尚有一段距离。总体而言，我国国内缺乏有效的检测BLV感染的抗体检测试剂盒。需要指出的是，国内外尚无有效的、商品化的针对BLV P24蛋白的检测试剂盒。国外进口商品化GP51检测试剂盒虽然检测精准度较为理想，但如果能与高效的P24检测试剂盒配合使用，可能更有利于达到BLV感染种群净化的目的。

发明内容

基于以上情况，本发明人拟研制针对BLV P24蛋白的高效抗体检测试剂盒，具体是应用大肠杆菌原核表达系统制备了P24蛋白，经体外亲和标签纯化免疫小鼠后，成功筛选制备了两株抗BLV P24蛋白的单克隆抗体，为后续该BLV抗体检测试剂盒的研发提供了良好基础。

本发明涉及牛白血病病毒BLV P24单克隆抗体及其活性片段，其靶向牛白血病病毒的P24蛋白主要中和表位。进一步本发明还涉及使用BLV P24单克隆抗体或其活性片段用于预防和治疗牛白血病病毒引起的牛白血病的方法和组合物。以及进一步涉及确定、鉴别和/或定量样品或疫苗中的牛白血病病毒BLV的方法和试剂盒。