[发明专利]一种调控hsa-MIR-4638的方法

说明书

本发明涉及一种调控hsa‑MIR‑4638的方法，属于生物技术领域。本发明提供的一种调控hsa‑miR‑4638的方法，该方法确定了P53和hsa‑miR‑4638的靶向调控关系，为进一步研究它们在心肌细胞损伤的作用及分子机制奠定了实验基础。本发明还通过突变位点载体构建，定点突变此序列后再进行双萤光素酶检测实验来验证，得知P53和hsa‑miR‑4638的靶向调控中，MIR4638‑1号活性最高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种调控hsa-MIR-4638的方法。

背景技术

P53是最常发生突变的肿瘤抑制因子之一，它参与调节蛋白编码基因和非编码RNA等多种生物学过程，主要在转录水平发挥作用，但也可通过非转录过程发挥作用。MIRNA可作为P53应激反应途径的关键介质，P53调节MIRNA的转录和加工，而MIRNA调节P53的活性和表达。因此，二者之间存在各种反馈/前反馈环。

通过生物信息学预测P53与hsa-MIR-4638存在结合位点，但是hsa-MIR-4638是否受P53调控，并参与心肌细胞损伤的作用及机制未见相关研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种调控hsa-MIR-4638的方法，该方法确定了P53和hsa-MIR-4638的靶向调控关系，为进一步研究它们在心肌细胞损伤的作用及分子机制奠定了实验基础。

为了实现上述目的，本发明的技术方案具体如下：

本发明提供一种调控hsa-MIR-4638的方法，该方法是通过P53调控hsa-MIR-4638表达的方法。

在上述技术方案中，优选的是，所述hsa-MIR-4638的扩增序列为以下序列中的一种：

MIR4638-1KpnIF:5'CGGGGTACCGCATCTGCCGAATCACCTGGACCATATTGG 3'；

MIR 4638-2KpnIF:5'CGGGGTACCCTACAAGGGCGCTTGCCTAGAGC 3'；

MIR4638-3KpnIF:5'CGGGGTACCCGGGAGATTCTCTCCCGAGGCCGGC3'；

MIR4638-4KpnIF:5'CGGGGTACCCTTCGGAGGAACACGGACTGGGGCA3'。

进一步优选的是，所述hsa-MIR-4638的扩增序列为以下序列：

MIR4638-1KpnIF:5'CGGGGTACCGCATCTGCCGAATCACCTGGACCATATTGG 3'。

在上述技术方案中，优选的是，所述方法包括以下步骤：

步骤一、构建MIR-4638载体

分别构建以下MIR-4638-1-4号扩增序列的质粒；

MIR4638-1KpnIF:5'CGGGGTACCGCATCTGCCGAATCACCTGGACCATATTGG 3'；

MIR 4638-2KpnIF:5'CGGGGTACCCTACAAGGGCGCTTGCCTAGAGC 3'；

MIR4638-3KpnIF:5'CGGGGTACCCGGGAGATTCTCTCCCGAGGCCGGC3'；

MIR4638-4KpnIF:5'CGGGGTACCCTTCGGAGGAACACGGACTGGGGCA3'；

步骤二、双荧光素酶基因报告检测