[发明专利]检测曲安奈德注射液中细菌内毒素的方法

说明书

本发明涉及一种检测曲安奈德注射液中细菌内毒素的方法，包括步骤(1)：采用有机溶剂和检查用水对曲安奈德注射液进行溶解，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇和二甲基亚砜中的任一种；步骤(2)：将溶解后的曲安奈德注射液作为供试品原液，用检查用水对该供试品原液进行稀释，确定所述溶解后的曲安奈德注射液在进行细菌内毒素检测时所采用的有机溶剂浓度；步骤(3)：采用确定的有机溶剂浓度的有机溶剂水溶液对所述曲安奈德注射液进行溶解，并对溶解后的曲安奈德注射液中细菌内毒素进行检测。通过本发明，能够将曲安奈德注射液完全溶解，能够将内毒素完全释放出来，避免了内毒素被包裹而无法被检出，从而提高了检测的准确度。

技术领域

本发明属于内毒素检测技术领域，具体而言，本发明涉及一种检测曲安奈德注射液中细菌内毒素的方法。

背景技术

细菌内毒素是注射液中常见的热原性杂质，若超过一定限度，会引发用药者体温升高，出现发热等症状。作为注射液中的关键质量属性，需要进行严格控制。鲎试剂法，特别是凝胶法检测细菌内毒素，自问世后一直为各国药典收载的细菌内毒素检查的主流方法。

《中国药典》(2020版，四部)《9251细菌内毒素检查法应用指导原则》中指出，一般应使用内毒素检查用水溶解样品进行细菌内毒素检查。在水中溶解度低的样品可以采取超声波、加热助溶、添加助溶剂、调节pH等方法提高其溶解度。采用包合技术的新型制剂如微球、脂质体等供试品，应采取适宜方法将包合体破坏，使包裹在内部的细菌内毒素完全释放，再进行检测。

其中，内毒素检查用水必须对试验不得有干扰。也就是说，内毒素检查用水是应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml(用于凝胶法)。试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。耐热器皿常用干热灭菌法(250℃、至少30分钟)去除，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。若使用塑料器具，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器具。

针对曲安奈德注射液而言，在进行细菌内毒素检查时，由于主药曲安奈德不溶于水，另外曲安奈德注射液中还含有混悬剂、表面活性剂、防腐剂、渗透压调节剂等辅料，各国药典及相关文献都没有提供合适的溶剂使曲安奈德注射液完全溶解，而是直接使用检查用水稀释注射液后进行细菌内毒素的检查，但是，由于主药曲安奈德与辅料(特别是作为混悬剂的羧甲基纤维素钠)难以同时溶解，因此，上述方法无法准确检测难溶的曲安奈德中包裹的内毒素，从而给患者带来了较大的风险。

发明内容

本发明正是鉴于上述现有技术中存在的问题而提出的，目的在于提供一种用于检测曲安奈德注射液中细菌内毒素的方法，并提供一种曲安奈德注射液的溶解用试剂盒及其应用。

一方面，本发明提供一种检测曲安奈德注射液中细菌内毒素的方法，包括如下步骤：

步骤(1)：采用有机溶剂和检查用水对曲安奈德注射液进行溶解，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇和二甲基亚砜中的任一种；以及

步骤(2)：将溶解后的曲安奈德注射液作为供试品原液，用检查用水对该供试品原液进行稀释，确定溶解后的曲安奈德注射液在进行细菌内毒素检测时所采用的有机溶剂的浓度；

步骤(3)：采用确定的有机溶剂的浓度的有机溶剂水溶液对曲安奈德注射液进行溶解，对溶解后的曲安奈德注射液中细菌内毒素进行检测。

优选地，在步骤(1)中，所述曲安奈德注射液中，每1ml所述曲安奈德注射液包括40mg的曲安奈德以及0.63％的羧甲基纤维素钠；

所述有机溶剂为甲醇时，每1mg曲安奈德对应的甲醇的加入量为0.196ml～0.204ml；

所述有机溶剂为乙醇时，每1mg曲安奈德对应的乙醇的加入量为0.135ml～0.140ml；

所述有机溶剂为正丙醇时，每1mg曲安奈德对应的正丙醇的加入量为0.135ml～0.140ml；