[发明专利]一种益生元、提取方法及在富集肠道益生菌中的应用

权利要求书

1.益生元在筛选调节糖脂代谢肠道益生菌中的应用，所述益生元由2个葡萄糖、1个6-乙酰基葡萄糖及3个阿拉伯糖分子通过α-1,3、α-1,5、β-1,5连接而成，其结构为α-T-Glcp-1→3-β-Glcp-1→(5-α-Araf-1)₃→3-α-(6-OAc)→Glcp-1。

2.一种益生元，所述益生元为α-T-Glcp-1→3-β-Glcp-1→(5-α-Araf-1)₃→3-α-(6-OAc)→Glcp-1。

3.一种益生元的提取方法，其特征在于，过程包括：

(1)以干燥的桑叶为原料，将16-20％(w/v)桑叶粉添加至pH7.0的去离子中，在75℃的条件下水提多糖10-15h，使用终浓度为60％-80％乙醇醇沉，5000×g离心10min，收集沉淀，得到桑叶多糖；

(2)取5-9％(w/v)桑叶多糖溶液，加入半纤维素酶0.2-0.5％(w/v)，调整pH值为6.0-6.5，在300-600MPa的条件下反应1-2h，8000×g离心5min，将上清液过反渗透膜进行浓缩，得到益生元粗反应液；

(3)将益生元粗反应液依次经过醇沉、纳滤、反渗透，将益生元粗反应液中的未被酶降解的多糖和单糖去除，经反渗透浓缩得到初步纯化的益生元溶液；

(4)将20-25％(w/v)初步纯化的益生元溶液加入到80cm×5.0cm离子交换树脂层析柱DEAE-Spepharose Fast Flow中，以0.3mol/L NaCl为洗脱剂，洗脱流速为1.0-2.0mL/min，收集60-200min洗脱液，反渗透浓缩，然后将20-25％(w/v)浓缩液加入到80cm×5.0cm葡聚糖凝胶G-15柱中，以去离子水为洗脱剂，洗脱流速为1.0-2.0mL/min，收集150-250min洗脱液，反渗透浓缩，得到纯化后的益生元溶液；

(5)通过核磁分析鉴定所制备的益生元具有特定的结构，其为：α-T-Gl cp-1→3-β-Glcp-1→(5-α-Araf-1)₃→3-α-(6-OAc)→Glcp-1。

4.一种筛选调节糖脂代谢的肠道益生菌的方法，其特征在于，以权利要求1所述的益生元筛选，过程包括：以所述益生元对小鼠进行灌胃处理，筛选益生元最显著富集的肠道菌群，然后将该菌群与其他菌群进行相关性分析，获得肠道益生菌。

5.根据权利要求4所述的一种筛选调节糖脂代谢的肠道益生菌的方法，其特征在于，灌胃用的益生元为25-100mg/kg.bw的益生元溶液。

6.根据权利要求4所述的一种筛选调节糖脂代谢的肠道益生菌的方法，其特征在于，益生元能特异性显著促进肠道菌群慢葡萄球菌、停滞棒杆菌、鼠乳杆菌的增殖，显著抑制毛螺菌科细菌28-4、梭菌sp.ASF502菌的生长。

7.根据权利要求4所述的一种筛选调节糖脂代谢的肠道益生菌的方法，其特征在于，肠道益生菌的有效活菌总数为10⁸-10¹⁰CFU/mL，灌胃剂量为2.5-10mL/kg·bw，灌胃时间为60-90d。

8.一种能调节糖脂代谢的肠道益生菌，其特征在于，所述益生菌由权利要求3-7任一项所述的方法筛选得到。

9.根据权利要求8所述的一种能调节糖脂代谢的肠道益生菌，其特征在于，所述益生菌为停滞棒杆菌。