[发明专利]一种桦褐孔菌发酵溶胞物的制备方法及其应用

权利要求书

1.一株桦褐孔菌(Inonotus obliquus)，其特征在于，所述桦褐孔菌在2021年12月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.23897。

2.一种利用权利要求1所述的桦褐孔菌制备发酵溶胞物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)发酵培养桦褐孔菌，获取桦褐孔菌发酵液；其中发酵培养基包括复合树皮提取液、碳源、氮源和生长因子；

(2)将所述桦褐孔菌发酵液过滤，收集菌体，干燥；

(3)将干燥后的菌体与水混匀，破壁，加入到无水乙醇溶液中提取过滤后，回流浓缩，得到桦褐孔菌醇提液；

(4)将所述桦褐孔菌醇提液复配去离子水和二元醇，过微孔滤膜后得到桦褐孔菌发酵溶胞物。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，发酵培养前，还包括种子液培养，其中，用于获取所述种子液的种子培养基包括以下重量百分比的组分：葡萄糖2-3wt％、酵母提取物0.1-0.5wt％、蛋白胨0.1-0.5wt％、磷酸二氢钾0.02-0.2wt％、硫酸镁0.01-0.1％，余量为水；

种子液培养条件为：温度26-34℃，培养时间为2-4天，摇床转速130-180转/分钟。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述发酵培养基包括以下重量百分比的组分：复合树皮提取液60-90wt％、葡萄糖3-5wt％、酵母提取物0.1-0.5wt％、蛋白胨0.1-0.5wt％、磷酸二氢钾0.02-0.2wt％、硫酸镁0.01-0.1wt％，余量为水；

发酵培养条件为：培养温度26-34℃，培养时间为3-6天，转速200-400rpm，通气量为0.5-3vvm，pH为6-7；以所述桦褐孔菌发酵液中的葡萄糖含量小于2g/L为培养终点。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述复合树皮提取液由如下方法制备：分别将桦树皮、柳树皮和榆树皮打碎成粉，过100目筛网后备用；将桦树皮粉、柳树皮粉和榆树皮粉加入去离子水中，60-90℃加热1-4小时，过滤取清液得到复合树皮提取液；所述桦树皮粉、柳树皮粉和榆树皮粉的质量比为5:3:2；所述桦树皮粉、柳树皮粉和榆树皮粉的总质量与所述去离子水的质量比为1:100。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述复合树皮提取液由如下方法制备：分别将桦树皮、柳树皮和榆树皮打碎成粉，过100目筛网后备用；将上述桦树皮粉、柳树皮粉和榆树皮粉分别以质量比1：100加入去离子水中，60-90℃加热1-4小时，过滤取清液分别得到桦树皮提取液、柳树皮提取液和榆树皮提取液，混合均匀，得到复合树皮提取液；所述桦树皮提取液、柳树皮提取液和榆树皮提取液的质量比为5:3:2。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，收集菌体方式为离心，转速为1500-8000rpm，时间为20-40min；干燥方式为烘干。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，菌体与水质量比为1:1；破壁方式为100-140mpa高压破壁；提取条件为：提取温度为50-65℃，提取时间为1-3h；浓缩温度为55-65℃；所述桦褐孔菌醇提液的质量为所述菌体质量的1.5倍。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述桦褐孔菌醇提液、去离子水与二元醇的质量比为10:30:1；所述二元醇为1,2-戊二醇或1,2-己二醇。

10.如权利要求1所述的桦褐孔菌或者权利要求2-9任一项所述方法得到的溶胞物在制备具有抗氧化和/或美白作用的化妆品中的应用。