[发明专利]一种辅助鉴定白菜耐热性的方法及其使用的A06-14144455位点

说明书

本发明公开了一种辅助鉴定白菜耐热性的方法及其使用的A06‑14144455位点。所述方法包括如下步骤：检测待测白菜基于A06‑14144455位点的基因型，然后进行如下判断：如果待测白菜基于A06‑14144455位点的基因型为TT纯合型或CT杂合型，则待测白菜具有或疑似具有耐热性；如果待测白菜基于A06‑14144455位点的基因型为CC纯合型，则待测白菜不具有或疑似不具有耐热性；A06‑14144455位点为白菜基因组中SEQ ID NO:1自5’末端起第101位的核苷酸。实验证明，本发明提供的方法可以辅助鉴定白菜耐热性且具有较高的准确率。本发明具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种辅助鉴定白菜耐热性的方法及其使用的A06-14144455位点，A06-14144455位点为白菜基因组中SEQ ID NO:1自5’末端起第101位的核苷酸。

背景技术

白菜原产我国，是我国种植面积最大、产量最高的蔬菜作物之一。“周年生产供应”已成为白菜产业发展的重大需求，然而白菜性喜冷凉，最适生长温度为15-20℃。当气温超过25℃时，往往表现出幼苗徒长、叶片易变黄、植株纤弱、病毒病严重、苦味、粗纤维含量增加，结球白菜抱球难等现象，这给春夏白菜生产带来极大困难。随着分子生物学和生物信息学的不断发展，发掘与分离不同来源的抗逆主效QTL、挖掘与耐热基因或QTL连锁的分子标记，并通过分子设计育种进行高效聚合，选育稳定、持久的抗逆品种，成为培育高抗优质大白菜品种的有效途径之一。

分子标记是在DNA水平上对目标性状进行选择，具有高效、快速、不受环境影响等优点，可以在幼苗期进行选择，加快育种过程，当前已经开发了一系列与白菜耐热相关的分子标记。郑晓鹰等用同工酶及RAPD和AFLP分子标记技术鉴定了与大白菜耐热性相关的遗传标记，获得了9个与耐热性QTL紧密连锁的分子标记。于栓仓等应用352个标记位点的大白菜AFLP和RAPD图谱，采用复合区间作图法对控制大白菜耐热性的数量性状基因位点(QTL)进行定位，用苗期热害指数进行耐热性表型鉴定共检测到5个耐热性QTL位点。李停停首次利用SRAP分子标记的方法进行了大白菜耐热性状的分子标记研究，获得的标记和耐热基因之间的交换值为16.7％，说明两者之间连锁较紧密。

SNP属于新一代分子标记，是指在染色体基因组水平上单个核苷酸的变异引起的DNA序列多态性。与第一、二代分子标记不同，SNP具有分布密度高、遗传稳定性好、二等位基因型等特点。不同物种全基因组的序列测定及比较表明，SNP遗传分析或基因诊断时的重现性、准确性及稳定性都优于SSR。当前，SNP分子标记在白菜耐热性筛选上鲜有报道，因此开发与白菜耐热相关的SNP分子标记具有重要意义。

KASP(Kompetitive Allele Specific PCR)即竞争性等位基因特异性PCR，是用于SNP分型的常用方法，具有高稳定性、准确性和低成本的特点，已被广泛应用于高通量分子辅助育种和品种鉴定。

发明内容

本发明的目的是辅助鉴定待测白菜的耐热性。

本发明首先保护引物组。所述引物组可由上游引物A06-14144455-X、上游引物A06-14144455-Y和下游引物A06-14144455-C组成；

所述上游引物A06-14144455-X可由荧光标签序列甲和SEQ ID NO:2自5’末端起第21至51位所示的DNA片段组成；

所述上游引物A06-14144455-Y可由荧光标签序列乙和SEQ ID NO:3自5’末端起第22至52位所示的DNA片段组成；

所述下游引物A06-14144455-C的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

所述引物组中，荧光标签序列甲的核苷酸序列可如SEQ ID NO:2自5’末端起第1至20位所示。所述荧光标签序列乙的核苷酸序列可如SEQ ID NO:3自5’末端起第1至21位所示。