[发明专利]一种生牛乳中乳铁蛋白的分离制备方法

权利要求书

1.一种生牛乳中乳铁蛋白的分离制备方法，其特征在于，所述分离制备方法包括如下步骤：

(1)生牛乳的预处理：新鲜的生牛乳加热后通过离心机分离除去脂肪；

(2)脱脂乳过滤：对脱脂乳进行过滤，除去杂质；

(3)上样：所述步骤(2)中滤液保温处理后进入PP层析系统，输送到蛋白层析柱中进行层析处理；

(4)缓冲溶液过滤：水、洗脱液和缓冲溶液用滤膜过滤；

(5)洗脱：用氯化钠溶液洗脱除杂，洗脱分离乳过氧化物酶，分离乳铁蛋白，进行目标蛋白洗脱；

(6)脱盐浓缩：进行样品脱盐浓缩处理；

(7)微滤除菌：脱盐浓缩的洗脱液经过蛋白溶液无菌过滤系统进行除菌；

(8)冷冻干燥：所述步骤(7)液体样品放入低温冷冻干燥设备中进行冷冻干燥。

2.根据权利要求1所述的生牛乳中乳铁蛋白的分离制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中生牛乳的温度为45-55℃。

3.根据权利要求1所述的生牛乳中乳铁蛋白的分离制备方法，其特征在于，所述步骤(1)分离过程中的离心转速11000rpm。

4.根据权利要求1所述的生牛乳中乳铁蛋白的分离制备方法，其特征在于，所述步骤(8)中冷冻干燥的冻干温度为-50℃～40℃。

5.根据权利要求4所述的生牛乳中乳铁蛋白的分离制备方法，其特征在于，所述冷冻干燥的过程分为两个过程，第一阶段为预冻阶段，温度从室温降到-50℃，真空升华至第二阶段，第二阶段的温度从-50℃升温至40℃，二个阶段的冻干的总时长为48小时。

6.根据权利要求5所述的生牛乳中乳铁蛋白的分离制备方法，其特征在于，所述步骤(7)微滤除菌采用蛋白溶液无菌过滤系统，采用0.22um孔径PES膜进行除菌。

7.根据权利要求6所述的生牛乳中乳铁蛋白的分离制备方法，其特征在于，所述步骤(6)脱盐浓缩采用的是全自动蛋白超滤系统，PES滤膜平板超滤膜进行样品脱盐浓缩。

8.根据权利要求7所述的生牛乳中乳铁蛋白的分离制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中洗脱过程中用0.1mol/L氯化钠溶液洗脱除杂，用0.5mol/L氯化钠溶液洗脱分离乳过氧化物酶，用1.1mol/L的氯化钠分离乳铁蛋白，进行目标蛋白洗脱，洗脱流速为100-200cm/h。

9.根据权利要求7所述的生牛乳中乳铁蛋白的分离制备方法，其特征在于，所述步骤(4)缓冲溶液洗脱液和缓冲溶液用10英寸0.45微米孔径PES滤膜过滤。

10.根据权利要求1-9任一项所述的生牛乳中乳铁蛋白的分离制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中滤液在室温进入层析系统，系统压力设置为0.5MPa，用二级以上纯化水平衡层析柱，设置线性流速600cm/h，PB缓冲溶液加入氯化钠分别配成pH为7的0.4-1.0mol/L洗脱液用PES滤膜过滤后对吸附的碱性蛋白进行洗脱，洗脱流速为200cm/h。