[发明专利]一种鸭源新型腺相关病毒实时荧光定量PCR检测的引物组及其试剂盒

说明书

本发明涉及一种鸭源新型腺相关病毒实时荧光定量PCR检测的引物组及其试剂盒；所述引物组序列为：上游引物DAAV‑SYF1：5’‑CTGTTCCAGATTGGTTGGAGA‑3’，下游引物DAAV‑SYR1：5’‑TCTTGATGCTGCTGGTTAGG‑3’；本发明利用所述引物组建立的实时荧光定量PCR检测方法具有检测快速、高效、定量准确、灵敏度高、特异性强的优点。实时荧光定量PCR反应结束后，通过观察其扩增曲线结合熔解曲线峰值(Tm值)即可直接对结果进行判断，本发明的建立可填补国内外相关领域空白。

技术领域

本发明属于兽医学领域，具体涉及一种鸭源新型腺相关病毒实时荧光定量PCR检测的引物组及其试剂盒。

背景技术

根据国际病毒分类委员会(The International Committee on Taxonomy ofViruses，ICTV)的最新分类，细小病毒科(Family:Parvoviridae)下设三个病毒亚科(SubFamily)：Densovirinae(浓病毒亚科)、Hamaparvovirinae(中文名称待定)和Parvovirinae(细小病毒亚科)。Parvovirinae(细小病毒亚科)下设10个病毒属(genera)，其中腺相关病毒(Adeno-associated virus，AAV)属于Parvovirinae(细小病毒亚科)下设的Genus:Dependoparvovirus(依赖性细小病毒属)。

腺相关病毒(Adeno-associated virus，AAV)属于细小病毒亚科依赖性细小病毒属。AAV为无包膜，正二十面体，直径20～26nm，基因组大小为4.7kb的单链DNA。AAV本身为复制缺陷病毒，只有在辅助病毒(如腺病毒、疱疹病毒等)作用下才能复制增殖。它有两个大的开放阅读框(ORF)，末端重复序列(ITR)位于开放阅读框的两侧。左侧Rep编码的非结构性蛋白，对病毒的包装和复制起重要作用。右侧Cap编码的结构蛋白，负责病毒颗粒的整合、复制和装配。AAV不但能感染分裂细胞也能感染非分裂细胞，在体内具有广泛的组织嗜性。目前AAV可分为三个基因群，大部分都从哺乳动物中检测到。研究还发现，已发现超过150余种病毒变异体。我们在开展水禽疫病流行病毒学调查时，在福建鸭群中发现存在鸭源新型腺相关病毒(duck origin adeno-associated virus，DAAV)感染，对其(命名为DAAV-FJ株)的Cap基因全长克隆发现，DAAV-FJ株Cap基因全长为2217bp，和DAAV/G003-20/Australia/2020(GenBank登录号为MW380871)核苷酸同源性为72.4％，氨基酸同源性仅为62.7％。

实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR，也见有简写为real-time fluorescent PCR或real-time PCR或qPCR)是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系。目前，关于鸭源新型腺相关病毒(DAAV)致病性的研究较少，致病机理等相关研究还未见涉及。当前国内外尚未见实时荧光定量PCR检测鸭源新型腺相关病毒(DAAV)的引物组、探针及其方法相关研究报道，本发明的建立可填补国内外相关领域空白。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鸭源新型腺相关病毒实时荧光定量PCR检测的引物组及其试剂盒，建立能够对鸭源新型腺相关病毒进行检测的实时荧光定量PCR检测方法，该方法不仅能够对鸭源新型腺相关病毒进行检测，还具有检测快速、高效、特异性强、敏感性高的特点。

本发明的目的通过如下技术方案实现：一种鸭源新型腺相关病毒实时荧光定量PCR检测的引物组，所述引物组序列如下：

上游引物DAAV-SYF1：5’-CTGTTCCAGATTGGTTGGAGA-3’，